طراحی و ساخت ناقل نوترکیب CRISPR ژن PARVA در سرطان ریه

پروتئین های PARVIN یک گروه از پروتئین های آداپتور هستند که واکنش اینتگرین ها و اکتین سیتواسکلتون ها را تسهیل میکنند و به سه گروه آلفا، بتا و گاما تقسیم میشوند. همچنین پروتئین های PARVIN با پروتئین های اکتین باندینگ و تنظیمی شامل پاکسیلین ، integrin linked kinase و تنظیم کننده های Rho GTPase , واکنش می دهند ، بنابراین نقشی مهم در پروسه های وابسته به اکتین شامل تنظیم شکل و اندازه ی سلول و مهاجرت سلول ایفا میکند. Parvin آلفا یک تنظیم کننده ی مهم رگزایی است . سیستم CRISPR یک تکنولوژی قدرتمند ویرایش ژنوم است که تغییرات گوناگونی را در سطح ژنوم که شامل اصلاح، روشن و خاموش کردن ژن را با هدف ایجاد انواع مدل های سلولی، حیوانی ، دارویی و ژن درمانی میباشد امکان پذیر ساخته است. هدف از انجام پروژه ایجاد تغییرات حذفی در ابتدای ناحیه ی core promoter آنکوژن PARVA در سرطان ریه با استفاده از سیستمCRISPR بود. الیگونوکلئوتیدهای طراحی شده با استفاده از سایت atum پس از دورشته ای شدن و اتصال به وکتور خطی شده کریسپر به سلول های میزبان E.coliDH5α منتقل شدند. نتایج یافته ها با استفاده از ژل الکتروفورز و آزمایش PCR بررسی شدند. آنالیز ژل الکتروفورز، تشکیل حالت دورشته ای gRNA و آزمایش PCR، همسانه سازی موفقیت آمیز آنکوژن PARVA را در ناقل بیانی کریسپر به اثبات رساند. با ساخت ناقل نوترکیب CRISPR و ایجاد تغییرات اصلاحی دقیق در ژنوم با اهدافی از قبیل تخریب آنکوژن ها و ژن درمانی میسر می گردد.

Keywords:

جهش , کریسپر , PARVA , سرطان , ریه