طراحی و ساخت ناقل نوترکیب CRISPR ویژه انتهای Core Promoter ژن JUN سرطان کبد

پروتوآنکوژن JUN بر روی کروموزوم شماره ی 1 با طولی برابر با 3257 نوکلئوتید دارای 1 اگزون است. عضو مهمی از فعال سازی فاکتور رونویسی پروتئین-(AP-1) 1 می باشد که مسئول تحول سلولی ، تکثیر ، تمایز و آپوپتوز است. این پروتئین در تمام مراحل چرخه سلولی مورد نیاز می باشد. بیان بیش از حد آن در سرطان کبد تشخیص داده شده است. فناوری CRISPR ابزاری ساده اما قدرتمند برای ویرایش ژنوم است که اجازه می دهد تا محققان به راحتی توالی DNA را تغییر داده و عملکرد ژن را تغییر دهند. بسیاری از کاربردهای بالقوه آن شامل ایجاد انواع مدل های سلولی، حیوانی ، دارویی و ژن درمانی است .هدف از انجام این پروژه ایجاد تغییرات حذفی درانتهای Core Promoter آنکوژن JUN با استفاده از سیستم کریسپیر بود. الیگونوکلئوتیدهای طراحی شده با استفاده از سایت Chop Chop پس از دورشته ای شدن و اتصال به وکتور خطی شده کریسپر به سلول های میزبان E.coliDH5α منتقل شدند. پس از رشد سلولهای نوترکیب نتایج یافته ها با استفاده از ژل الکتروفورز و آزمایش PCR بررسی شدند. آنالیز ژل الکتروفورز، تشکیل حالت دورشته ای gRNA و آزمایشPCR ، همسانه سازی موفقیت آمیز آنکوژن JUN را در ناقل بیانی کریسپر ثابت کرد. با ساخت ناقل نوترکیب CRISPR ایجاد تغییرات اصلاحی دقیق در ژنوم با اهدافی از جمله تخریب آنکوژن ها و ژن درمانی امکان پذیر می گردد.

Keywords:

جهش , کریسپر , JUN , سرطان , کبد