طراحی و تولید آزمایشگاهی پپتید آنتی ژنی چند اپیتوپی تحریک کننده سلول های T بر علیه اکینوکوک و ارزیابی پاسخ ایمنی در مدل حیوانی
عنوان مقاله: طراحی و تولید آزمایشگاهی پپتید آنتی ژنی چند اپیتوپی تحریک کننده سلول های T بر علیه اکینوکوک و ارزیابی پاسخ ایمنی در مدل حیوانی
شناسه ملی مقاله: R-1053020
منتشر شده در سازمان تحقیقات، آموزش و ترویج کشاورزی در سال 1394
شناسه ملی مقاله: R-1053020
منتشر شده در سازمان تحقیقات، آموزش و ترویج کشاورزی در سال 1394
مشخصات نویسندگان مقاله:
مجید اسماعیلی زاد
علی میرجلیلی
حبیب اله پایکاری
خلاصه مقاله:
مجید اسماعیلی زاد
علی میرجلیلی
حبیب اله پایکاری
در این پروژه نخست اپیتوپهای خطی سلول های Th1 پنج آننتی ژن مهم اکینوکوکوس گرانولوزوس با نرم افزار های Propred و IEDBبا بهترین قدرت اتصال به مولکول های MHC پیش بینی شدند. پس از سنتز DNA، مینی ژن ساخته شده داخل وکتور بیانی pET41a+ کلون شد به منظور فهم بهتر اثر تجمعی اپیتوپها قطعه دربرگیرنده اپیتوپ های آنتی ژن EgA31 با PCR تکثیر وجداگانه در دو وکتورpGEX4T1 وpEGFP-N1 کلون شد. پروتیینهای کایمریک در سلولE. coli فیوژن با GST بیان شدند. بیان GFP-ChEgA31 در سلول های CHO با فلورسنت میکروسکوپی و RT-PCR تایید شد. بیان پروتیینهای کایمریک با وسترن بلاتینگ تایید شد، سپس با روش افینیتی خالص سازی و به موش های 6/C57BL همراه با اجوانت فروند ایمن شدند. نتایج الایزا نشان داد کهIFN- در سلول های طحال موشهای ایمن شده با آنتی ژن GST-ChEgMEA و GFP-ChEgA31حدودا 1300 پیکوگرم و در گروه GST-ChEgA31 حدودا 1300-634 پیکوگرم در میلی لیتر بیان شد، که نشان داد پروتیین کایمریک چند اپیتوپی بخوبی سیستم ایمنی سلولی را تحریک کرده است. از طرفی افزایش معنی داری در میزان IL،4 IL10مشاهده نشد. موشهای ایمن شده، با تعداد پانصد پروتواسکولکس زنده چالنج و بعد از سه ماه کیست ها شمارش شدند. مشاهدات نشان داد که آنتی ژن %50 GST-ChEgA31 و در گروه تزریق شده با pEGFP-ChEgA31 حدودا 60 % مصونیت ایجاد نمودند، در حالیکه آنتی ژن کایمریک GST-ChMEAمصونیت 99/6-%100 علیه پروتواسکولکس ایجاد نمود. نتایج گواه این مطلب است که پیش بینی اپیتوپ ها بر اساس متد بیوانفورماتیک جهت طراحی آنتی ژن بر علیه اکینوکوکوس گرانولوزوس مفید بوده است
صفحه اختصاصی مقاله و دریافت فایل کامل: https://civilica.com/doc/1053020/