همسانه‏ سازی و بیان قسمت ایمنی‏ زای اگزوتوکسین A از سودوموناس‏آئروژینوزا

  مقدمه: سودوموناس آئروژینوزا میکروارگانیسم فرصت طلبی بوده که به یکی از عومل اصلی عفونت‏های بیمارستانی در سراسر جهان تبدیل شده است. اگزوتوکسین A یک آنزیم خارج سلولی است که توسط اغلب سویه های بالینی سودوموناس آئروژینوزا ترشح می‏شود. اگرچه پاتوژنز بیماری‏های ناشی از سودوموناس پیچیده است، ولی شواهد کلینیکی و تجربی فراوان نشان دهنده ارتباط اگزوتوکسین A با موارد ابتلا و مرگ و میر ناشی ازعفونت‏های سودوموناسی است .   مواد و روش ‏‏ ها: در مطالعه حاضر، یک قطعه ایمنی زای 490 جفت بازی شامل دومین انتقال دهنده و دومین 1b از اگزوتوکسین A سودوموناس آئروژینوزا سویه PAO1 توسط PCR تکثیرداده شد. محصول PCR در اشرشیا کلی DH5α کلون گشت و سپس در اشرشیا کلی BL21 با استفاده از وکتور پلاسمیدی (pET28a) بیان شد. وزن مولکولی پلی پپتید موردنظر در ژل SDS - PAGE ، 18 کیلو دالتون تعیین شد .   نتایج: نتایج PCR و colony PCR تایید کننده صحت همسانه‏سازی دومین ایمنی‏زای اگزوتوکسین A بود. بررسی موقعیت پلی پپتید کلون شده درالکتروفورز عمودی با استفاده از ژل SDS - PAGE نشان داد که پلی پپتید مورد نظر توسط اشرشیاکلی به فضای پری پلاسمی تراوش می‏شود .   بحث و نتیجه ‏ گیری: از آنجایی‏که حضور توکسین کامل برای ایجاد پاسخ های ایمنی ضروری نیست واین پلی پپتید نوترکیب از خاصیت آنتی ژنیک برخوردار است، بنابراین ممکن است به عنوان واکسن مؤثری در پیشگیری ازعفونت‏های ناشی از سودوموناس عمل کند .

Keywords:

سودوموناس آئروژینوزا سویهPAO1 , کلونینگ , اگزوتوکسین A , دومین ایمنی زا