خالص‏سازی و تعیین ویژگی‏های آمیلوپولولاناز مقاوم به حلال و نمک‏دوست خارج سلولی جدا شده از آرکی نمک‏دوست Halorubrum سویه Ha25

Publish Year: 1392
نوع سند: مقاله ژورنالی
زبان: Persian
View: 295

This Paper With 14 Page And PDF Format Ready To Download

  • Certificate
  • من نویسنده این مقاله هستم

استخراج به نرم افزارهای پژوهشی:

لینک ثابت به این Paper:

شناسه ملی سند علمی:

JR_BJM-2-7_002

تاریخ نمایه سازی: 4 بهمن 1399

Abstract:

  مقدمه : نمک­دوست­ها، به ویژه هالوآرکی­ها یکی از مهم‏ترین گروه­های میکروارگانیسم­های افراطی­دوست هستند. هیدرولازها ی نمک­دوست بسیار مطالعه شده­اند و برای کاربردهای صنعتی و زیست فن­آوری مورد توجه هستند. با توجه به اهمیت هیدرولازهای نمک­دوست، مطالعه حاضر اولین گزارش در مورد خالص­سازی آنزیم آمیلوپولولاناز از یک آرکی نمک­دوست است .   مواد و روش ‏‏ ها: آرکی نمک­دوست Halorubrum سویه Ha25 آنزیم آمیلوپولولاناز خارج سلولی نمک­دوست و مقاوم به حلال را در غلظت بالای نمک سدیم کلراید تولید می­کند. به منظور خالص­سازی آنزیم، از رسوب­دهی پروتئین­ها با حلال اتانول و کروماتوگرافی تعویض آنیونی استفاده شده وجرم مولکولی آنزیم بعد از تخلیص، به کمک روش SDS - PAGE تعیین شد. بعد از تخلیص آنزیم، ویژگی­های آنزیم بررسی شد. به منظور تعیین پایداری آنزیم در حضور حلال­های آلی، محلول­ آنزیمی به طور جداگانه در مجاورت هفت حلال آلی قرار گرفت. در انتها محصول عملکرد آنزیم روی دو سوبسترای نشاسته و پولولان به روش کروماتوگرافی لایه­ی نازک بررسی شد .   نتایج: جرم مولکولی آنزیم به کمک روش SDS - PAGE به میزان kDa 140 تعیین شد. بیشینه­ی فعالیت آمیلولیتیک و پولولیتیک آنزیم در دمای 50 درجه سانتی‏گراد بود. اسیدیته بهینه برای فعالیت آمیلولیتیکی 0/7 و برای فعالیت پولولیتیکی 5/7 تعیین شد. آنزیم در محدوده وسیع غلظتی صفر تا 5/4 مولار از نمک NaCl فعال بود. اثر حلال­های آلی مختلف روی فعالیت پولولیتیک و آمیلولیتیک آنزیم آمیلوپولولاناز نشان داد که آنزیم در حضور حلال­های غیر قابل اختلاط با آب دارای پایداری بیشتری نسبت به حلال­های قابل اختلاط با آب است. تنها محصول عملکرد آنزیم روی هر دو سوبسترای نشاسته و پولولان، گلوکز تعیین شد .   بحث و نتیجه ‏ گیری: آرکی نمک­دوست Halorubrum سویه Ha25 ، آنزیم آمیلوپولولاناز نمک­دوست و گرمادوست را تولید می­کند. با توجه به فعالیت آنزیم در شرایطی نظیر دما و شوری بالا و آب فعال کم، این آنزیم گزینه­ای مناسب به منظور کاربردهای زیست فن­آوری، نظیر تیمار پسآب­های داراری شوری بالا، حلال­های آلی و ترکیبات نشاسته­ای است .  

Keywords:

آمیلوپولولاناز نمک دوست‌ , خالص‌سازی پروتئین , آرکی نمک دوست افراطی , Halorubrum , مقاومت به حلال آلی

Authors

مریم سیروسی

دانشجوی دکتری میکروبیولوژی، دانشگاه تهران، ایران

محمد علی آموزگار

دانشیار میکروبیولوژی، دانشگاه تهران، ایران

خسرو خواجه

استاد بیوشیمی، دانشگاه تربیت مدرس، ایران

مهران حبیبی رضایی

دانشیار بیوشیمی، دانشگاه تهران، ایران

مصطفی فاضلی

کارشناس ارشد میکروبیولوژی، دانشگاه تهران، ایران

مراجع و منابع این Paper:

لیست زیر مراجع و منابع استفاده شده در این Paper را نمایش می دهد. این مراجع به صورت کاملا ماشینی و بر اساس هوش مصنوعی استخراج شده اند و لذا ممکن است دارای اشکالاتی باشند که به مرور زمان دقت استخراج این محتوا افزایش می یابد. مراجعی که مقالات مربوط به آنها در سیویلیکا نمایه شده و پیدا شده اند، به خود Paper لینک شده اند :
  •  References ...
  • (1)Fazeli M, Amoozegar M A,Habibi Rezaei M, Siroosi M, Production ...
  • (2) Grant W D, Kamekura M, McGenity T J, Ventosa ...
  • (3) Margesin R, Schinner F. Potential of halotolerant and halophilic ...
  • (4) Adams M W W, Kelly R M. Enzymes from ...
  • (5) Makhdoumi Kakhki A, Amoozegar M A, Mahmodi Khaledi E. ...
  • (6) Mevarech M, Frolow F, Gloss L M, Halophilic enzymes: ...
  • (7) Sivaramakrishnan S, Gangadharan D, Nampoothiri K M, Soccol C ...
  • (8) Niehaus F, Bertoldo C, Ka¨hler M, Antranikian G. Extremophiles ...
  • (9) Doma nacute–Pytka M, Bardowski J, Pullulan degrading enzymes of ...
  • (10) Kim O S, Cho Y J, Lee K, Yoon ...
  • (11) Dyall-Smith M. The Halohandbook: Protocols for halobacterial genetics. March ...
  • (12) Miller G. Use of dinitrosalicylic acid reagent for determination ...
  • (13) Bradford M M. A rapid and sensitive method for ...
  • (14) Laemmli U K. Cleavage of structural proteins during the ...
  • (15) Chung Y C, Kobayashi T, Kanai H, Akiba T, ...
  • (16) Mrudula S, Gopal R, Seenayya G. Purification and characterization ...
  • (17) Ganghofner D, Kellermann J, Staudenbauer W, Bronnenmeier K. purification ...
  • (18) Mathupala S, Lowe S, Gregory Zeikus J. Sequencing of ...
  • (19) Jiao Y, Ming-Sheng L, Xu J, Fang Y. A ...
  • (20) Hutcheon G, Bolhuis A. Characterisation of a highly stable ...
  • (21) Perez-Pomares F, Ferrer J, Pire C, Marhuenda-Egea FC, Bonete ...
  • (22) Dong G, Vieille C, Zeikus G. Cloning, sequencing, and ...
  • (23) Mrudula S, Reddy G, Gunda S. Purification and characterization ...
  • (24) Zareian S, Khajeh K, Ranjbar B, Dabirmanesh B, Ghollasi ...
  • (25) Al-ZaZaee M M, Gurumurthy D M, Rajeshwara A N. ...
  • (26) Coronado M J, Vargas C, Hofemeister J, Ventosa A, ...
  • (27) Duffner F, Bertoldo C, Andersen J T, Wagner K, ...
  • (28) Danson M J, Hough D W. The structural basis ...
  • (29) Diger A, Antranikian G. Isolation and Characterization of a ...
  • (30) Saha B, Lamed R, Lee C, Mathupala S. Characterization ...
  • (31) Shafiei M, Ziaee A, Amoozegar M A. Purification and ...
  • (32) Prakash B, Madhukumar M S, Muralikrishna G, Sreeramulu K. ...
  • (33) Doukyua N, Ogino H. Organic solvent-tolerant enzymes. Biochem Eng ...
  • (34) Fukushima T, Echigo A, Inoue A, Usami R. Organic ...
  • (35) Xin Li, Yu Y Y. Characterization of an organic ...
  • نمایش کامل مراجع