خالصسازی و تعیین ویژگیهای آمیلوپولولاناز مقاوم به حلال و نمکدوست خارج سلولی جدا شده از آرکی نمکدوست Halorubrum سویه Ha25
عنوان مقاله: خالصسازی و تعیین ویژگیهای آمیلوپولولاناز مقاوم به حلال و نمکدوست خارج سلولی جدا شده از آرکی نمکدوست Halorubrum سویه Ha25
شناسه ملی مقاله: JR_BJM-2-7_002
منتشر شده در در سال 1392
شناسه ملی مقاله: JR_BJM-2-7_002
منتشر شده در در سال 1392
مشخصات نویسندگان مقاله:
مریم سیروسی - دانشجوی دکتری میکروبیولوژی، دانشگاه تهران، ایران
محمد علی آموزگار - دانشیار میکروبیولوژی، دانشگاه تهران، ایران
خسرو خواجه - استاد بیوشیمی، دانشگاه تربیت مدرس، ایران
مهران حبیبی رضایی - دانشیار بیوشیمی، دانشگاه تهران، ایران
مصطفی فاضلی - کارشناس ارشد میکروبیولوژی، دانشگاه تهران، ایران
خلاصه مقاله:
مریم سیروسی - دانشجوی دکتری میکروبیولوژی، دانشگاه تهران، ایران
محمد علی آموزگار - دانشیار میکروبیولوژی، دانشگاه تهران، ایران
خسرو خواجه - استاد بیوشیمی، دانشگاه تربیت مدرس، ایران
مهران حبیبی رضایی - دانشیار بیوشیمی، دانشگاه تهران، ایران
مصطفی فاضلی - کارشناس ارشد میکروبیولوژی، دانشگاه تهران، ایران
مقدمه : نمکدوستها، به ویژه هالوآرکیها یکی از مهمترین گروههای میکروارگانیسمهای افراطیدوست هستند. هیدرولازها ی نمکدوست بسیار مطالعه شدهاند و برای کاربردهای صنعتی و زیست فنآوری مورد توجه هستند. با توجه به اهمیت هیدرولازهای نمکدوست، مطالعه حاضر اولین گزارش در مورد خالصسازی آنزیم آمیلوپولولاناز از یک آرکی نمکدوست است . مواد و روش ها: آرکی نمکدوست Halorubrum سویه Ha25 آنزیم آمیلوپولولاناز خارج سلولی نمکدوست و مقاوم به حلال را در غلظت بالای نمک سدیم کلراید تولید میکند. به منظور خالصسازی آنزیم، از رسوبدهی پروتئینها با حلال اتانول و کروماتوگرافی تعویض آنیونی استفاده شده وجرم مولکولی آنزیم بعد از تخلیص، به کمک روش SDS - PAGE تعیین شد. بعد از تخلیص آنزیم، ویژگیهای آنزیم بررسی شد. به منظور تعیین پایداری آنزیم در حضور حلالهای آلی، محلول آنزیمی به طور جداگانه در مجاورت هفت حلال آلی قرار گرفت. در انتها محصول عملکرد آنزیم روی دو سوبسترای نشاسته و پولولان به روش کروماتوگرافی لایهی نازک بررسی شد . نتایج: جرم مولکولی آنزیم به کمک روش SDS - PAGE به میزان kDa 140 تعیین شد. بیشینهی فعالیت آمیلولیتیک و پولولیتیک آنزیم در دمای 50 درجه سانتیگراد بود. اسیدیته بهینه برای فعالیت آمیلولیتیکی 0/7 و برای فعالیت پولولیتیکی 5/7 تعیین شد. آنزیم در محدوده وسیع غلظتی صفر تا 5/4 مولار از نمک NaCl فعال بود. اثر حلالهای آلی مختلف روی فعالیت پولولیتیک و آمیلولیتیک آنزیم آمیلوپولولاناز نشان داد که آنزیم در حضور حلالهای غیر قابل اختلاط با آب دارای پایداری بیشتری نسبت به حلالهای قابل اختلاط با آب است. تنها محصول عملکرد آنزیم روی هر دو سوبسترای نشاسته و پولولان، گلوکز تعیین شد . بحث و نتیجه گیری: آرکی نمکدوست Halorubrum سویه Ha25 ، آنزیم آمیلوپولولاناز نمکدوست و گرمادوست را تولید میکند. با توجه به فعالیت آنزیم در شرایطی نظیر دما و شوری بالا و آب فعال کم، این آنزیم گزینهای مناسب به منظور کاربردهای زیست فنآوری، نظیر تیمار پسآبهای داراری شوری بالا، حلالهای آلی و ترکیبات نشاستهای است .
کلمات کلیدی: آمیلوپولولاناز نمک دوست, خالصسازی پروتئین, آرکی نمک دوست افراطی, Halorubrum, مقاومت به حلال آلی
صفحه اختصاصی مقاله و دریافت فایل کامل: https://civilica.com/doc/1145433/