ایجاد جایگاه اتصال Cu2+ در پروتئین فلوئورسانس سبز بهبودیافته (EGFP) با استفاده از جهش زایی هدفمند جهت اندازه گیری یون مس

مس یکی از عناصر ضروری و یک کو فاکتور کاتالیزوری برای بسیاری از آنزیمها میباشد. عدم تعادل یون مس در بدن انسان میتواند باعث تولید بیش ازحد رادیکال های هیدروکسیل، زوال عقلی، بیماری آلزایمر، پارکینسون و همچنین رشد و پیشرفت تومور شود. در جوامع امروزی استفاده گسترده از مواد حاوی مس به طورجدی افزایش یافته و باعث ایجاد آلودگی مس در محیط شده است. تکنیک های مرسومی که جهت بررسی مقدار مس استفاده میشوند دارای معایبی ازجمله هزینه بالا و صرف زمان طولانی هستند، بنابراین توسعه یک سیستم ساده برای نظارت بر مقدار این یون در محیط زیست بسیار مهم می باشد. در این بررسی تأثیر جهش دوگانه S202H /Q204H -EGFP بر روی میزان نشر پروتئین فلوئورسانس سبز بهبودیافته (EGFP) در حضور غلظتهای مختلف مس سنجش و با EGFP نوع طبیعی مقایسه شد. بر اساس نتایج به دست آمده نشر فلوئورسانس EGFP جهشیافته نسبت به EGFP نوع وحشی در حضور مس، از خود تغییر و حساسیت بیشتری نشان داد و بر اساس آنالیزهای آماری حداقل میزان مس قابل شناسایی توسط EGFP جهش یافته 12 نانومولار و برای EGFP نوع وحشی نیز 1/66 میکرومولار محاسبه شد. همچنین در حضور غلظت 0/5 میلیمولار از یونهای فلزی مختلف، نشر فلوئورسانس EGFP جهش یافته تنها در حضور مس کاهش یافت و سایر فلزات تأثیر چندانی بر روی میزان نشر این پروتئین نداشتند. بنابراین میتوان نتیجه گرفت که EGFP جهش یافته نسبت به EGFPنوع وحشی با حساسیت و اختصاصیت بیشتری یون مس را شناسایی می کند.

Keywords:

پروتئین فلوئورسانس سبز بهبودیافته , جهش زایی , یون مس