بررسی مولکولی ژن های مولد کولی باکتین کلبسیلا پنومونیه جدا شده از شیر خام با روش Multiplex-PCR به عنوان عامل ابتلا به سرطان کلورکتال

کلبسیلا پنومونیه باکتری گرم منفی، غیر متحرک، دارای کپسول، تخمیر کننده لاکتوز، بی هوازی اختیاری و میله­ای شکل است. آن از دیرباز به عنوان پاتوژن فرصت­طلب مورد توجه قرار گرفته است و یک علت شایع عفونت­های بیمارستانی است. خوشه ژنی  pksآنزیم­هایی را تولید می­کند که مسئول تولید سنتز کولی­باکتین هستند. کولی­باکتین یک ژنوتوکسین است که باعث آسیب بهDNA  می­شود و با افزایش ویرولانس مرتبط است. همچنین حدس زده می­شود که کولی­باکتین در توسعه سرطان کولورکتال نقش داشته باشد. در این مطالعه شیوع ژن­های pks،clbN  و clbB در جدایه­های کلبسیلا پنومونیه مورد بررسی قرار گرفت. در این مطالعه 220 نمونه از شیر خام به دست آمد. سپس تمام نمونه­ها در محیط کشت ویولت رد بایل آگار و سپس بلاد آگار، مک کانکی آگار و شکلات آگار برای جداسازی باکتری­ها کشت شدند. آزمایش­های بیوشیمیایی و میکروبیولوژی برای تایید باکتری انجام شد. DNA از تمام جدایه ها با استفاده از کیت استخراجDNA  ژنومی استخراج شد. سپس واکنش زنجیره ای پلیمراز چندگانه با استفاده از پرایمرهای اختصاصیانجام شد. یافته­ها نشان داد که 60 مورد از کلبسیلا پنومونیه از 220 نمونه (27/27 درصد) جداسازی شده با استفاده از تست­های فنوتیپی استاندارد مورد تایید قرار گرفتند. آزمون PCR نشان داد که 6 سویه (10 درصد) دارای ژن­های  clbBو  clbNبودند. کلبسیلا پنومونیهpks  مثبت در نمونه­های ما شایع بود. با توجه به اثرات پلیوترروپیک آن، کولی­باکتین عمیقا بر فیزیولوژی سلولی اثر می­گذارد، باعث ایجاد اختلالات DNA می­شود که منجر به پیر شدن یا آپوپتوزیس می­شود. به نظر می­رسد شناسایی کلبسیلا پنومونیهpks  مثبت در شیر بسیار ضروری برای جلوگیری از سرطان کلورکتال است.

Keywords:

کلبسیلا پنومونیه , clbB , clbN , واکنش زنجیره ای پلیمراز چندگانه