بیان ترشحی آنزیم تجزیه کننده ترکیبات ارگانوفسفره با کاربرد نظامی و صنعتی در باکتری باسیلوس سوبتیلیس

مقدمه: ارگانوفسفات نام عمومی استرهای اسید فسفریک است که در زمینه های مختلف بخصوص حوزه نظامی کاربرد دارند. با توجه به اینکه تولید و استفاده از سلاح های شیمیایی در جنگ های نوین چشمگیر می باشد، لذا مطالعه و پژوهش در زمینه شناسایی، پیشگیری و درمان آلودگی با این ترکیبات امری ضروری است. این ترکیبات اثرات منفی زیادی بر سیستم بیولوژیک بدن موجودات زنده دارند. مطالعات نشان داده تجزیه بیولوژیک این ترکیبات بهینه ترین روش برای امحای این ترکیبات است.  آنزیم های مختلفی از جمله آنزیم opdB، برای تجزیه این ترکیبات شناسایی شده اند. مواد و روش ها: ژن این آنزیم با تکنیک PCR از ژنوم باکتری لاکتوباسیلوس برویس ATCC۳۶۷ تکثیر شد. محصول PCR بدست آمده در وکتور pWB۹۸۰ کلون گردید. سوش باکتریایی باسیلوس سوبتیلیس مستعد با وکتور نوترکیب ترانسفرم شدند. بیان ترشحی پروتئین در محیط بسیار غنی با تکنیک SDS- PAGE بررسی شد. فعالیت آنزیم به کمک اندازه گیری جذب ترکیب ارگانوفسفره کلروپیریفوس مصرفی و تخمین میزان مصرفی آن در مدت زمان تعیین شده در طول موج ۲۷۶ نانومتر بررسی شد. نتایج: باند پروتئینی ۲۷ کیلودالتون بر روی ژل SDS-PAGE مشاهده شد. فعالیت آنزیم Unit/mL ۸۳/۱۰ تخمین زده شد. بحث: سوش نوترکیب حاصل، قادر به تولید ترشحی آنزیم کارآمد و فعال می باشد.

Keywords:

organophosphorous , B. subtillis WB۸۰۰ , secretory expression , opd B enzyme , ترکیبات ارگانوفسفره , B. subtillis WB۸۰۰ , بیان ترشحی , آنزیم opdB