تولید هورمون رشد انسانی نوترکیب در سویه اوریگامی اشریشیاکلی و مقایسه میزان استخراج آن با دو روش اولتراسونیک و انجماد و ذوب

مقدمه: هورمون رشد انسانی یک پروتئین تک‏رشته است که دارای ۱۹۱ اسید‏آمینه و وزن مولکولی حدود ۲۲ کیلودالتون است. به علت فعالیت‏های زیستی مهم و متنوع هورمون رشد، این هورمون دارای کاربردهای گسترده‏ایی در پزشکی و بیوتکنولوژیست. از اواخر سال ۱۹۷۰ استفاده از بیان ژن برای تولید پروتئین‏های نوترکیب صنعتی تبدیل به یک صنعت چند میلیارد دلاری شده است. از طرفی مشکلاتی که در استخراج پروتئین درون‏سلولی وجود دارد باعث شده است که چندین روش برای این کار ارایه شود که در بسیاری از این روش‏ها نیاز به تجهیزات خاص است. اما در بیشتر مطالعات، پژوهشگران نیاز به یک روش سریع و ارزان قیمت برای تخریب سلول دارند. هدف این پژوهش، تولید هورمون رشد انسانی توترکیب و مقایسه میزان استخراج آن با روش انجماد و ذوب و روش اولتراسونیک در سویه اوریگامی ‏اشریشیاکلی است‏‏. ‏‏‏ مواد و روش‏‏ها: سلول‏ها‏ی مستعد سویه اوریگامی ‏اشریشیاکلی با وکتور حاوی ژن هورمون رشد انسانی ترانسفورم شده و با کشت در محیط LB و القا با IPTG هورمون رشد انسانی نوترکیب تولید و با دو روش انجماد و ذوب و اولتراسونیک، استخراج و سپس این پروتئین با استفاده از روش‏ها‏ی الایزا، برادفورد، دات‏بلات و وسترن‏بلات بررسی شد. ‏‏‏ نتایج: عمل ترانسفورم کردن باکتری با کارایی بالایی انجام گرفت و نتایج حاصل از دات‏بلات و وسترن‏بلات نشان داد که پروتئین هورمون رشد انسانی نوترکیب به خوبی تولید شد. با استخراج پروتئین با روش‏ها‏ی انجماد و ذوب و اولتراسونیک و بررسی نتایج حاصل از روش‏های الایزا و برادفورد مشخص شد که میزان پروتئین استخراج شده در روش انجماد و ذوب آهسته بیشتر از انجماد و ذوب سریع و کمابیش هم اندازه پروتئین استخراج شده در روش اولتراسونیک است. ‏‏‏ بحث و نتیجه‏گیری: برابر بودن میزان پروتئین استخراج شده در روش انجماد و ذوب آهسته و روش اولتراسونیک نشان دهنده این است که روش انجماد و ذوب آهسته، در مواردی که امکان استفاده از تجهیزات خاص و گران‏قیمت مثل اولتراسونیک وجود ندارد، جایگزین مناسبی برای این روش است. 

Keywords:

اوریگامی , هورمون رشد انسانی نوترکیب , اولتراسونیک , انجماد و ذوب , دات‏ بلات , وسترن‏ بلات