جداسازی و توالی یابی ژن تولید اسید فولیک از باسیل های خاک و کلونینگ آن در باکتری اشرشیا کلای

چکیده مقدمه: فولیکاسید یا ویتامین B۹ از مهمترین ویتامینهای ضروری بدن است که نقش اساسی در انتقال گروههای یککربنه و بسیاری از مسیرهای بیوشیمیایی دارد و کمبود آن موجب بروز بیماریهای عصبی، کمخونی و مشکلات رشد در کودکان میشود. هدف مطالعه حاضر، جداسازی ژن رمزکننده فولیکاسید از باسیلهای خاک، توالییابی آن و همسانهسازی این ژن در باکتری اشریشیا کلی بود تا بتوان گام موثری در راستای تولید صنعتی این ویتامین از سویههای بومی برداشت مواد و روشها: در مطالعه حاضر، ۴۰ نمونه از عمق ۱۰ تا ۱۵ سانتیمتری خاک مناطق مختلف اطراف شهر سیرجان نمونهبرداری شدند. باکتریهای باسیلوس با استفاده از محیطکشت Skim milkجداسازی و با روشهای مولکولی و بیوشیمیایی شناسایی شدند. جدایههای دارای ژن FOLA به کمک روش مولکولی PCR مشخص شدند و ژن تکثیرشده در باکتری E. coliهمسانهسازی و توالییابی شد؛ سپس بیان ژن به روش Real-time PCR بررسی و روابط فیلوژنتیکی آن مشخص شد. نتایج: درنتیجه غربالگری نمونههای خاک ارسالی به آزمایشگاه، درمجموع ۱۲ کلنی مشکوک به باسیلهای گرم مثبت جداسازی شدند که بر اساس ویژگیهای ریختشناختی، میکروسکوپی و آزمونهای بیوشیمیایی شناسایی شدند و مشخص شد همه گونهها ژن FOLA را دارند. همسانهسازی FOLA در یکی از گونهها بهطور موفقیتآمیز انجام و بیان ژن آن با Real-time PCRتایید شد. بحث و نتیجهگیری: در بررسی حاضر، ژن FOLA از باکتری باسیلوس هالوتولرانس جداشده از خاکهای مناطق اطراف شهر سیرجان با موفقیت در وکتور بیانی PTG۱۹-T همسانهسازی شد و بیان موفقیتآمیز ژن نشان داد میتوان با گسترش این روش، گامی در راستای تولید صنعتی فولات برداشت.

Keywords:

واژه های کلیدی: همسانهسازی , باسیلوس , فولات