مطالعه ژنومی ناتوکیناز جداشده از باسیلهای خاک و کلونکردن آن در باکتری اشریشیا کلی بهمنظور استفاده دارویی

چکیده مقدمه: ناتوکیناز، آنزیمی استخراجشده از غذایی ژاپنی است که در فرایند تخمیر آن تولید میشود؛ این آنزیم آثار مثبت درخور توجهی در درمان بیماریهای قلبی عروقی، درمان یا پیشگیری از بیماریهای آمیلوئیدی همچون آلزایمر و کاهش کلسترول خون دارد. مطالعه حاضر در نظر داشته تا به مطالعه ژنومی ناتوکیناز جداشده از باسیلهای خاک مناطق اطراف تهران و کلونکردن آن در باکتری اشریشیا کلی بهمنظور استفاده دارویی بپردازد. مواد و روشها: در مطالعه حاضر، ۶۰ نمونه از عمق ۵ تا ۱۰ سانتیمتری خاک مناطق مختلف اطراف شهر تهران نمونهبرداری و باکتریهای باسیلوس آنها به روشهای مولکولی و بیوشیمیایی جداسازی شدند. باکتریهای دارای ژن ناتوکیناز به روش PCR مشخص شدند و ژن تکثیرشده در باکتری اشریشیا کلی کلون و توالییابی شد؛ سپس بیان ژن به روش Real time PCR بررسی شد و روابط فیلوژنتیکی آن مشخص شدند. نتایج: درنتیجه غربالگری نمونههای خاک ارسالی به آزمایشگاه، درمجموع ۱۲ کلنی مشکوک به باسیلهای گرم مثبت جداسازی شدند که بر اساس ویژگیهای ریختشناختی، میکروسکوپی و آزمونهای بیوشیمیایی تعیین هویت شدند و مشخص شد ۱۱ گونه ژن هدف را دارند. کلونکردن و بیان ژن ناتوکیناز بهطور موفقیتآمیز انجام و همولوژی ۹۹ تا ۱۰۰ درصدی با سایر آنزیمها مشاهده شد. بحث و نتیجهگیری: در بررسی حاضر، ژن ناتوکیناز از باکتری باسیلوس سوبتیلیس RH۵ جداشده از خاکهای مناطق اطراف تهران با موفقیت در وکتور بیانی PTG۱۹-T کلون شد و بیان موفقیتآمیز ژن آن نشان داد با گسترش این روش میتوان در راستای تولید صنعتی این آنزیم مهم گام برداشت.

Keywords:

واژه های کلیدی: ناتوکیناز , باسیلوس , کلونکردن