کلون سازی cDNA سیستاتین ذرت (CCs)، و ارزیابی اثر بازدارندگی پروتئین آن در شرایط آزمایشگاهی

Publish Year: 1386
نوع سند: مقاله ژورنالی
زبان: Persian
View: 278

This Paper With 13 Page And PDF Format Ready To Download

  • Certificate
  • من نویسنده این مقاله هستم

این Paper در بخشهای موضوعی زیر دسته بندی شده است:

استخراج به نرم افزارهای پژوهشی:

لینک ثابت به این Paper:

شناسه ملی سند علمی:

JR_JWSS-11-1_028

تاریخ نمایه سازی: 22 اردیبهشت 1400

Abstract:

جداسازی و کلون سازی ژن های نوترکیب بازدارنده پروتاز (PIs)گیاهی و انتقال آنها به ژنوم گیاهان دیگر، راه را برای مقاومت گیاهان تراریخته در مقابل بعضی آفات مهاجم هموار ساخته است. در پژوهش حاضر با علم به قدرت مهارکنندگی سیستاتین ها به عنوان عامل مهارکننده پروتاز سیستئین، ژن های سیستاتین از ژنوم ذرت جداسازی گردید. cDNA مربوط به این ژن ها با استفاده از پرایمرهای اختصاصی در محیط آزمایشگاه ساخته شد و پس از خالص سازی محصول RT - PCR در ناقل های پلاسمید pUC۱۹ و pGEX ۲T کلون گردید. ناقل های پلاسمید نوترکیب (حاوی سیستاتین های ذرت) با استفاده از دستگاه شوک الکتریکی به سلول های مستعد اشرشیاکولی Dh۵α انتقال داده شدند. سلول های مستعد حاوی کلون های نوترکیب در محیط کشت مساعد رشد داده شدند و پروتئین های سیستاتین متصل به گلوتاتیون-اس-ترانسفراز (GST) با استفاده از فیلتر گلوتاتیون آگاروز بید (Glutation Agarose Bead) خالص سازی گردیدند. در هر مرحله از پیشرفت کار وجود ژن های سیستاتین به وسیله الکتروفورز نمونه ها مورد تایید قرار گرفت. در آزمایش های بعدی اثر بازدارندگی پروتئاز و پایداری نسبی سیستاتین های نوترکیب مورد ارزیابی قرار گرفت.