قدرت اله ریاضی

جداسازی و کلون سازی ژن های نوترکیب بازدارنده پروتاز (PIs)گیاهی و انتقال آنها به ژنوم گیاهان دیگر، راه را برای مقاومت گیاهان تراریخته در مقابل بعضی آفات مهاجم هموار ساخته است. در پژوهش حاضر با علم به قدرت مهارکنندگی سیستاتین ها به عنوان عامل مهارکننده پروتاز سیستئین، ژن های سیستاتین از ژنوم ذرت جداسازی گردید. cDNA مربوط به این ژن ها با استفاده از پرایمرهای اختصاصی در محیط آزمایشگاه ساخته شد و پس از خالص سازی محصول RT - PCR در ناقل های پلاسمید pUC۱۹ و pGEX ۲T کلون گردید. ناقل های پلاسمید نوترکیب (حاوی سیستاتین های ذرت) با استفاده از دستگاه شوک الکتریکی به سلول های مستعد اشرشیاکولی Dh۵α انتقال داده شدند. سلول های مستعد حاوی کلون های نوترکیب در محیط کشت مساعد رشد داده شدند و پروتئین های سیستاتین متصل به گلوتاتیون-اس-ترانسفراز (GST) با استفاده از فیلتر گلوتاتیون آگاروز بید (Glutation Agarose Bead) خالص سازی گردیدند. در هر مرحله از پیشرفت کار وجود ژن های سیستاتین به وسیله الکتروفورز نمونه ها مورد تایید قرار گرفت. در آزمایش های بعدی اثر بازدارندگی پروتئاز و پایداری نسبی سیستاتین های نوترکیب مورد ارزیابی قرار گرفت.

: Protease Inhibitor, Corn Cystatins (CCs), pUC۱۹ plasmid vector,, competent cell, cloning., سیستاتین ذرت، بازدارنده پروتئازی، ناقل پلاسمید، سلول مستعد , ، تراریخته، شوک الکتریکی