کلون سازی و بیان ژن میدکاین نوترکیب انسانی در اشریشیاکولای سویه ی اوریگامی
Publish place: Journal of Cell & Tissue، Vol: 6، Issue: 2
Publish Year: 1394
نوع سند: مقاله ژورنالی
زبان: Persian
View: 377
This Paper With 10 Page And PDF Format Ready To Download
- Certificate
- من نویسنده این مقاله هستم
استخراج به نرم افزارهای پژوهشی:
شناسه ملی سند علمی:
JR_JCT-6-2_003
تاریخ نمایه سازی: 27 اردیبهشت 1400
Abstract:
هدف: هدف این پژوهش کلون سازی و بیان ژن کد کنندهی میدکاین انسانی در اشریشیاکولای بوده که پس از انجام مراحل لازم در مقیاس آزمایشگاهی محقق گردید. مواد و روشها: روش ها شامل کشت سلول، استخراج RNA، ساخت cDNA، تکنیک های کلون سازی، القای بیان با IPTG (ایزوپروپیل تیوگالاکتوزیداز)، ارزیابی بیان بهوسیله ی ژل پلی اکریل آمید و تایید توسط وسترن بلات بود. نتایج: ژن میدکاین در pET-۲۱a(+) کلون و سپس به اوریگامی منتقل شد. این فاکتور رشد در کلونی حاوی pET-۲۱a(+) نوترکیب پس از ۱۶ ساعت انکوباسیون در دمای ۱۸ درجه سانتیگراد با هم زدن در ۲۵۰ دور در دقیقه، در سطح سیتوپلاسمی بیان گردید. بیان پروتئین ۱۳ کیلودالتونی دارای دم هیستیدینی از طریق وسترن بلات مورد تایید قرار گرفت. نتیجه گیری: با توجه به اینکه سویه اوریگامی در ژن های TrxB و gor جهش یافته است، سینوپلاسم محیطی اکسید کننده می باشد، بههمین سبب باعث افزایش تشکیل باندهای دی سولفید میشود. بنابراین بهنظر میرسد که پس از بیان میدکاین، باقی ماندههای سیتوزین بهصورت محلول باقی میمانند. این شرایط باعث بهوجود آمدن محیط مناسبی برای فولدینگ صحیح پروتئین و حل شدن آن میشود.
Keywords:
Authors
سعادت الله غفاری
دانشگاه آزاد اسلامی واحد پزشکی تهران
علی اصغر دلدار
گروه ژنتیک و بیوشیمی دانشگاه صنعتی مالک اشتر تهران
علی بهرامی
گروه ژنتیک و بیوشیمی دانشگاه صنعتی مالک اشتر تهران
عمران اسماعیل زاده
گروه ژنتیک مولکولی، پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری تهران
بهارک مهیاد
گروه ژنتیک و بیوشیمی دانشگاه صنعتی مالک اشتر تهران
فاطمه روح الله
دانشگاه آزاد اسلامی واحد پزشکی تهران
مراجع و منابع این Paper:
لیست زیر مراجع و منابع استفاده شده در این Paper را نمایش می دهد. این مراجع به صورت کاملا ماشینی و بر اساس هوش مصنوعی استخراج شده اند و لذا ممکن است دارای اشکالاتی باشند که به مرور زمان دقت استخراج این محتوا افزایش می یابد. مراجعی که مقالات مربوط به آنها در سیویلیکا نمایه شده و پیدا شده اند، به خود Paper لینک شده اند :