مقایسه چند شکلی طولی قطعات برشی ۱۲۰۰ (RFLP) جفت باز از ژن آران ای ریبوزومی ۱۶Sدر فیتوپلاسماهای عامل جاروک یونجه و گل سبز کنجد در استان یزد

جاروک یونجه و گل سبز کنجد از مهم ترین بیماری های فیتوپلاسمایی در کشور و استان یزد می باشند که از گسترش، پراکندگی و میزان خسارت اقتصادی زیادی بر خوردار هستند. در طی سال های ۹۴ لغایت ۹۵ از مزارع آلوده کنجد و یونجه در شهرستان های یزد، اردکان، ابرکوه و خاتم بازدید و بوته های آلوده ی گل سبز کنجد و جاروک یونجه در داخل گلدان قرار داده شد و به آزمایشگاه منتقل گردید. عامل بیماری با استفاده از سس به پروانش منتقل و در این گیاهان علایم بیماری های فیتوپلاسمایی مشاهده شد. از گیاهان پروانش مایه زنی شده دی ان ای کل با استفاده از روش ژانگ و همکاران ( ۱۹۹۸) استخراج و آزمون واکنش زنجیره ای پلیمراز (PCR) مستقیم با استفاده از جفت آغازگر P۱/P۷ و واکنش زنجیره ای پلیمراز دو مرحله ای با استفاده از جفت آغازگرهای P۱/P۷ (مرحله اول) و R۱۶mF۲R۱۶mR۲ و R۱۶F۲n/R۱۶R۲ (مرحله دوم) انجام شد. گیاهان پروانش مایه زنی شده دارای علایم در آزمون پی سی آر واکنش مثبت نشان دادند و در آن ها قطعات مورد انتظار به ترتیب با اندازه های تقریبی ۱۸۰۰، ۱۴۰۰ و ۱۲۰۰ جفت باز تکثیر شد. مقایسه ی هضم آنزیمی محصول PCR دو مرحله ای با جفت آغازگر R۱۶F۲n/R۱۶R۲ که با استفاده از آنزیم های Alu۱، Hinf۱ ، HaeIII ،Mse۱ و Rsa۱ انجام شد و نقوش آنزیمی با یکدیگر و با نقوش حاصل با همین آنزیم ها در فیتوپلاسماهای دیگر مقایسه شدند که این نقوش در نمونه های فیلودی کنجد و جاروک یونجه با آنزیم های برشی ذکر شده یکسان و با مقایسه ی نقوش حاصل از هضم آنزیمی با فیتوپلاسماهای دیگر با همین آنزیم ها مشخص گردید که فیلودی کنجد و جاروک یونجه در این مناطق ناشی از یک فیتوپلاسما متعلق به گونه ی پیشنهادی Candidatus Phytoplasma aurantifolia یا گروه جاروک بادام زمینی ( Peanut witches’broom (۱۶SrII می باشند. در مجموع با توجه به نتایج این آزمایش و اطلاعات قبلی در این زمینه به نظر می رسد ماهیت فیلودی کنجد و جاروک یونجه در این مناطق یکسان باشد.

Keywords:

آر ان ای ریبوزومی , پی سی آر , Candidatus phytoplasma aurantifolia