نانوبیوسنسور مبتنی بر هیبریداسیون DNA برای تشخیص توالی ژن rfbE در نمونه واقعی باکتری اشریشیاکولی O۱۵۷:H۷

زمینه و هدف: علائم بالینی بیماران آلوده به باکتری اشریشیاکولی O۱۵۷:H۷ دامنه وسیعی دارد و تشخیص بیماری از روی علایم آن دشوار است. روش های تشخیص متعارف عوامل بیولوژیک دارای معایب بسیاری می باشند. هدف از انجام این تحقیق، تشخیص توالی ژن rfbE در نمونه واقعی باکتری اشریشیاکولی O۱۵۷:H۷ به وسیله نانوبیوسنسور الکتروشیمیایی بود. روش بررسی: در این مطالعه تجربی، برای آماده سازی نمونه قبل از سنجش با نانوبیوسنسور، ژنوم باکتری اشریشیاکولی O۱۵۷ به روش CTAB-NaCl و با استفاده از کیت تخلیص DynaBioTM DNA Extraction Mini Kit استخراج گردید. هضم آنزیمی DNA ژنومی باکتری اشریشیاکولی O۱۵۷ در دمای ۳۷ درجه سانتی گراد و به مدت ۴ دقیقه و دناتوراسیون حرارتی صورت گرفت. به منظور اطمینان، ژن rfbE باکتری اشریشیاکولی O۱۵۷: H۷ توسط واکنش PCR تشخیص داده شد. توالی ژن rfbE در نمونه واقعی باکتری اشریشیاکولی O۱۵۷: H۷ به وسیله نانوبیوسنسور مبتنی بر هیبریداسیون DNA مورد سنجش قرار گرفت. یافته ها: نتایج به دست آمده از مقاومت انتقال بار بیانگر بر هم کنش مناسب بین ssDNA تثبیت شده روی الکترود با DNA ژنوم هضم شده باکتری اشریشیاکولی O۱۵۷:H۷ و محصول PCR بوده و نشان دهنده تشخیص موفقیت آمیز قطعه ای از ژن rfbE باکتری اشریشیاکولی O۱۵۷:H۷ می باشد. این نانوبیوسنسور قادر به تشخیص ژنوم هضم شده باکتری تا رقت ۶-۱۰ بود که این رقت متناظر با غلظت ۱۰۲ باکتری اشریشیاکولی در میلی لیتر است. نتیجه گیری: در این تحقیق، نانوبیوسنسور مبتنی بر هیبریداسیون DNA برای تشخیص توالی ژن rfbE در نمونه واقعی باکتری اشریشیاکولی O۱۵۷:H۷ با دقت و حساسیت مطلوب به کارگیری شد که می تواند زمینه ای برای ساخت ابزار تشخیص DNA باشد.

Keywords:

Escherichia coli O۱۵۷:H۷ , Nanobiosensor , DNA hybridization. , باکتری اشریشیاکولی O۱۵۷:H۷ , نانوبیوسنسور , هیبریداسیون.