ساخت کتابخانه ی آنتی بادی تک دمین شتری بر ضد آنتی ژن های سلولی سرطان سینه

زمینه و هدف: آنتی بادی های زنجیره سنگین شتری Camelied-derived heavy chain) (VHH= یک آنتی بادی شتری بوده و کوچک ترین واحد باند شونده به آنتی ژن است. اندازه کوچک نانوبادی ها بزرگ ترین مزیت آن ها می باشد که سبب دستکاری ژنتیکی راحت آن ها می شود. این مطالعه با هدف ساخت کتابخانه ی آنتی بادی تک دمین از شتر ایمن شده با یک رده سلولی آدنوکارسینومای سینه ی انسان (SKBR۳) طراحی و اجرا شد. روش بررسی: در این مطالعه تجربی ابتدا عصاره سلول SKBR۳ طی سه نوبت به صورت زیر پوستی به یک شتر تزریق گردید. سپس RNA کامل از طحال شتر استخراج و قطعات VHH به کمک روش RT-PCR ساخته و تکثیر شدند. قطعات VHH در درون فاژمید Pcomb۳x قرار گرفتند و به روش الکتروپوریشن قطعات نوترکیب وارد باکتری های DH۵α شدند. تنوع کتابخانه ی تهیه شده توسط تکنیک انگشت نگاری آنزیمی مورد بررسی قرار گرفت و در نهایت بیان VHH با روش SDS-PAGE ارزیابی شد. یافته ها: در این پژوهش کتابخانه آنتی بادی شتری با بیش از ۱۰۵ کلونی ساخته شد. همچنین انگشت نگاری آنزیمی نشان داد که کتابخانه ی آنتی بادی حاصل دارای تنوع بالایی می باشد. بررسی های اولیه بوسیله SDS-PAGE مشخص کرد که پروتئین VHH با وزن مولکولی ۱۵ کیلو دالتون در باکتری های ترانسفورم شده بیان می شود. نتیجه گیری: تهیه ی کتابخانه ی آنتی بادی ایمن بر ضد رده سلولی SKBR۳، امکان جداسازی آنتی بادی های اختصاصی VHH بر ضد آنتی ژن های مختلف سرطان سینه را فراهم می کند.

Keywords:

VHH , Camel antibody library , Breast cancer. , نانوبادی , کتابخانه ی آنتی بادی شتری , سرطان سینه