بیان هترولوگ، خالص سازی و سنجش فعالیت آنزیم کربوکسی پپتیداز نوترکیب جدید از باکتری کوهنلا A۰۱
عنوان مقاله: بیان هترولوگ، خالص سازی و سنجش فعالیت آنزیم کربوکسی پپتیداز نوترکیب جدید از باکتری کوهنلا A۰۱
شناسه ملی مقاله: JR_NCMBJ-11-42_007
منتشر شده در در سال 1399
شناسه ملی مقاله: JR_NCMBJ-11-42_007
منتشر شده در در سال 1399
مشخصات نویسندگان مقاله:
سید مهدی نعیمی - Department of Cellular and Molecular Biology, Faculty of Advanced Science and Technology, Tehran Medical Sciences, Islamic Azad University, Tehran, Iran
سعید امین زاده - Bioprocess Engineering Group, Institute of Industrial and Environmental Biotechnology, National Institute of Genetic Engineering and Biotechnology (NIGEB), Tehran, Iran.
سویار ساری - Department of Cellular and Molecular Biology, Faculty of Advanced Science and Technology, Tehran Medical Sciences, Islamic Azad University, Tehran, Iran
فهیمه نعمتی منصور - Department of Biotechnology, Faculty of Advanced Science and Technology, Tehran Medical Sciences, Islamic Azad University, Tehran, Iran.
مریم ناصرالاسلامی - Department of Cellular and Molecular Biology, Faculty of Advanced Science and Technology, Tehran Medical Sciences, Islamic Azad University, Tehran, Iran
خلاصه مقاله:
سید مهدی نعیمی - Department of Cellular and Molecular Biology, Faculty of Advanced Science and Technology, Tehran Medical Sciences, Islamic Azad University, Tehran, Iran
سعید امین زاده - Bioprocess Engineering Group, Institute of Industrial and Environmental Biotechnology, National Institute of Genetic Engineering and Biotechnology (NIGEB), Tehran, Iran.
سویار ساری - Department of Cellular and Molecular Biology, Faculty of Advanced Science and Technology, Tehran Medical Sciences, Islamic Azad University, Tehran, Iran
فهیمه نعمتی منصور - Department of Biotechnology, Faculty of Advanced Science and Technology, Tehran Medical Sciences, Islamic Azad University, Tehran, Iran.
مریم ناصرالاسلامی - Department of Cellular and Molecular Biology, Faculty of Advanced Science and Technology, Tehran Medical Sciences, Islamic Azad University, Tehran, Iran
سابقه و هدف: آنزیم های تجزیه کننده پروتئین یا پروتئولایتیک با انجام هیدرولیز برگشتناپذیر پیوند پپتیدی برای ادامه بقای موجودات زنده ضروری هستند. کربوکسی پپتیدازها از جمله آنزیم های پروتئولایتیکی هستند که در موجودات بسیاری یافت می شوند و از این آنزیم ها در صنایع مختلف - مثل صنایع غذایی و داروسازی – بهوفور استفاده می شود. هدف از این تحقیق، بیان آنزیم کربوکسی پپتیداز باکتری بومی کوهنلا A۰۱، خالص سازی و سنجش فعالیت آن است.
مواد و روش ها: ابتدا ژن کربوکسی پپتیداز کوهنلا A۰۱ که در وکتور pET-۲۶b(+) کلون شده بود؛ با ایجاد سلولهای مستعد از باکتری میزبان بیانی (اشرشیاکلی BL۲۱) وارد آن گردید. این باکتری در محیط کشت LB تلقیح و با استفاده از IPTG ، بیان پروتئین القا شد. سپس سلول ها جمعآوری، شکسته شده، پروتئین بیان شده با استفاده از ستون کروماتوگرافی تمایلی نیکل سفاروز، تخلیص شد.
یافته ها: نتایج به دست آمده مشخص نمودند که آنزیم نوترکیب بیان شده - طبق پیشبینی انجام شده - دارای ساختمان دومی با ۳۴ درصد مارپیچ آلفا، ۲۶ درصد صفحات بتا، ۵ درصد نواحی فاقد ساختار و ۳۵ درصد شامل لوپ و سایر ساختارها بوده، یک گلوتامات کربوکسی پپتیداز بهشمار می رود. این آنزیم قادر است در دمای ۵۰ درجه سلسیوس و pH معادل ۷، ریشه گلوتامات را از اسید فولیک جدا نماید. وزن مولکولی آن kDa ۶/۴۱ بوده، فعالیت محاسبه شده این آنزیم (با سوبسترای فولات) در شرایط سنجش، U/ml ۱۷۹ است.
نتیجه گیری: باتوجهبه اینکه گلوتامات کربوکسی پپتیداز (کربوکسی پپتیداز G) دارای کاربرد دارویی است و کربوکسی پپتیداز نوترکیب کوهنلا A۰۱ دارای مقاومت گرمایی و در نتیجه پایداری مناسب در دمای محیط است، بهاحتمال می توان از این آنزیم پس از بهینهسازی، در مصارف دارویی استفاده نمود.
کلمات کلیدی: Carboxypeptidase, Cohnella, Folic Acid, Glutamate, IAU science, اسید فولیک, کربوکسی پپتیداز, کوهنلا, گلوتامات, IAU science
صفحه اختصاصی مقاله و دریافت فایل کامل: https://civilica.com/doc/1240736/