بررسی اثرات القای آپاپتوزی و مهار رشدی متابولیت محلول در اتیل استات،Streptomyces albogriseolus strain NBRC ۳۴۱۳ بر روی : K۵۶۲ رده ی سلولی لوسمی میلوئیدی انسان

اکتینوسیت ها، باکتری های گرم مثبتی می باشند که متابولیت های ثانویه ای را به صورت مولکول های کوچک تولید می کنند. یکی از تحقیقات موثر در این زمینه، یافتن ترکیبات ضد سرطانی برای مهار رشد سلول های سرطانی، القای آپاپتوز و مرگ سلولی می باشد. هدف از تحقیق حاضر، بررسی اثرات مهاری رشد و القای آپاپتوز متابولیت های تولید شده توسط باکتری های اکتینومیست بر روی رده سلول های سرطانی K۵۶۲ می باشد. در این بررسی آزمایشگاهی، از متابولیت های ثانویه یStreptomyces albogriseolus strain NBRC ۳۴۱۳ در غلظت های ۰ تا ۱۵۰ میکروگرم بر میلی لیتر در سه زمان ۲۴، ۴۸ و ۷۲ جهت تیمار سلول های K۵۶۲ استفاده شد. همچنین از تست MTT برای بررسی اثرات مهاری رشد و تعیین IC۵۰ استفاده شد . سپس توسط میکروسکوپ فلورسنت و با استفاده از رنگ های آکریدین اورنج (AO) و اتیدیوم بروماید (EtBr)، آپاپتوز یا نکروز شدن سلول ها مطالعه گردید. در مرحله شناسایی، باکتری ها در محیط کشت Starch Casein Agar کشت داده شد و از طریق PCR، قطعات تکثیر و به دنبال آن توالی یابی و Blast انجام شد. متابولیت های اتیل استاتی Streptomyces albogriseolus strain NBRC ۳۴۱۳ اثرات مهاری رشد و القای آپاپتوز را در سلول های K۵۶۲ نشان داد . بر اساس تست MTT، IC۵۰ متابولیت ثانویه سویه مورد بررسی در تیمار ۷۲ ساعت حدود ۹۰µg/ml به دست آمد، که این داده ها از نظر آماری نسبت به گروه کنترل معنی دار بودند. همچنین در بررسی القای آپاپتوز با استفاده از میکروسکوپ فلورسنت، سلول های تیمار شده در مقایسه با گروه کنترل، DNA آن ها قطعه قطعه شده و کروماتین نیز به صورت سبز یا نارنجی فشرده مشاهده شدند که نشان دهنده ی آپاپتوز بود. شناسایی مولکولی نیز بر اساس توالی ژن ۱۶S rRNA صورت گرفت. توالی ها به کمک پرایمر های ۲۷ F و ۱۴۹۲ R تکثیر شدند؛ مقایسه توالی های به دست آمده با توالی های موجود در بانک جهانی ژن از طریق برنامه BLAST شباهت ۹۳ درصدی سویه مورد مطالعه را با باکتری Streptomyces albogriseolus strain NBRC ۳۴۱۳ نشان داد. با توجه به این تاثیرات مهار رشدی و القای آپاپتوزی، از این ترکیبات به دست آمده می توان برای مطالعه بیشتر در بیماران مبتلا به لوسمی میلوئیدی مزمن استفاده کرد.

Keywords:

لوسمی میلوئیدی مزمن , متابولیت ثانویه , اکتینوسیت ها , آپاپتوز