انتقال و بیان ژن GnRH نوترکیب ماهی در باکتری BL۲۱ E. coli به منظور تولید هورمون نوترکیب
Publish place: Iranian Scientific Fisheries Journal، Vol: 28، Issue: 3
Publish Year: 1398
نوع سند: مقاله ژورنالی
زبان: Persian
View: 139
This Paper With 12 Page And PDF Format Ready To Download
- Certificate
- من نویسنده این مقاله هستم
این Paper در بخشهای موضوعی زیر دسته بندی شده است:
استخراج به نرم افزارهای پژوهشی:
شناسه ملی سند علمی:
JR_ISFJ-28-3_013
تاریخ نمایه سازی: 20 آبان 1400
Abstract:
هورمون آزاد کننده گنادوتروپین (GnRH) یک نوروپپتید موثر در تنظیم فرآیند تولیدمثل در مهره داران می باشد. آنالوگ های مختلفی از این هورمون به فرم سنتتیک با نیمه عمرهای مختلف برای تکثیر مصنوعی آبزیان در بازار موجود می باشند. هدف از این تحقیق بررسی بیان GnRH نوترکیب در باکتری Escherichia coliسویه BL۲۱به منظور تولید هورمون نوترکیب می باشد. در این تحقیق، توالی DNA مربوط به پپتید GnRH طراحی شده در وکتور بیانی pET۲۸a+ کلون شد. واکنش زنجیره ای پلیمراز (PCR) به کمک آغازگرهای اختصاصی صحت کلونینگ را نشان داد. وکتور نوترکیب pET۲۸a+/GnRH به باکتری بیانی E. coli BL۲۱ (DE۳) انتقال داده شد و صحت انتقال با کلونی PCR سنجیده شد و باند ۱۸۶ جفت بازی حاصل از تکثیر ژن بر ژل آگارز مشاهده گردید. سپس برای بررسی بیان، باکتری نوترکیب در محیط Luria Bertani (LB) حاوی آنتی بیوتیک کانامایسین در دمای ۳۷ درجه سانتی گراد کشت داده شد و با غلظت یک میلی مولار Isopropyl β-D-۱-thiogalactopyranpside (IPTG) القاء شد و بعد از القاء، باکتری در دو دما و زمان مختلف شامل ۶ ساعت در دمای ۳۷ درجه سانتی گراد و ۲۴ ساعت در دمای ۲۰ درجه سانتی گراد قرار گرفت. میزان بیان به کمک الکتروفورز ژل SDS-PAGE تعیین شد. بررسی SDS-PAGE نشان دهنده بیان پپتید بوده و باند هشت کیلودالتونی مربوط به پپتید مورد نظر بر روی ژل قابل مشاهده بود. همچنین میزان بیان پپتید در دمای ۲۰ درجه سانتی گراد بیشتر از دمای ۳۷ درجه سانتی گراد می باشد. با توجه به نتایج بدست آمده از تحقیق حاضر می توان نتیجه گرفت که هورمون GnRH قابلیت تولید در سیستم بیانی پروکاریوتی همانند اشریشیاکلی را دارد و پس از خالص سازی می تواند به عنوان یک همولوگ خاص برای درمان اختلالات تولید مثلی در آبزیان معرفی گردد.
Keywords:
Authors
صدیقه محمدزاده
Sari Agricultural Sciences and Natural Resources University
سکینه یگانه
Fisheries Department, Faculty of Animal Sciences and Fisheries, Sari Agricultural Sciences and Natural Resources University, Sari, Iran
فاطمه مرادیان
دانشکده علوم دام و شیلات دانشگاه علوم کشاورزی و منابع طبیعی ساری
بهرام فلاحتکار
دانشگاه گیلان
سلواین میلا
دانشگاه لورین
مراجع و منابع این Paper:
لیست زیر مراجع و منابع استفاده شده در این Paper را نمایش می دهد. این مراجع به صورت کاملا ماشینی و بر اساس هوش مصنوعی استخراج شده اند و لذا ممکن است دارای اشکالاتی باشند که به مرور زمان دقت استخراج این محتوا افزایش می یابد. مراجعی که مقالات مربوط به آنها در سیویلیکا نمایه شده و پیدا شده اند، به خود Paper لینک شده اند :