کلونینگ و بیان ژن drRRA باکتری داینوکوکوس رادیودورانس در اشریشیا کلی سویه Origami

سابقه و هدف: داینوکوکوس رادیودورانس یکی از باکتری های مقاوم به پرتو است و می تواند در محیط های رادیو اکتیو که سایر موجودات قادر به رشد در آن نیستند، به حیات خود ادامه دهد. مطالعات نشان می دهد که چندین پروتئین آنتی اکسیدان و ترمیم کننده DNA در مقاومت بخشی آن نسبت به پرتو نقش دارند. پروتئین DrRRA یکی از پروتئین های تنظیمی مهم داینوکوکوس رادیودورانس در مقاومت بخشی به پرتو است. هدف از این مطالعه کلونینگ و بیان ژن drRRA در اشریشیا کلی بوده است. مواد و روش ها: ژن drRRA داینوکوکوس رادیودورانس بصورت سنتتیک در وکتور pGEM-B۱ ساخته شد و به دنبال آن در وکتور بیانی pET۲۱a ساب کلون شد. برای تایید ساب کلونینگ، هضم آنزیمی و توالی یابی انجام شد. برای تایید بیان ژن drRRA در اشریشیا کلی سویه Origami، ژل الکتروفورز پلی اکریل آمید و وسترن بلاتینگ انجام شد. یافته ها: پلاسمید pET۲۱a حاوی ژن drRRA به همراه برچسب هیستیدینی در قسمت C-ترمینال بطور موفقیت آمیز ساخته شد. همچنین، پروتئین نوترکیب DrRRA بصورت داخل سلولی در اشریشیا کلی ترانسفورم شده تولید شد. نتیجه گیری: نتایج این مطالعه نشان داد که ساب کلونینگ و بیان ژن drRRA در میزبان اشریشیا کلی امکان پذیر می باشد، همچنین، میزان بیان پروتئین هدف مناسب بوده و می توان مقاومت بخشی پروتئین DrRRA را به پرتو در سیستم های پروکاریوتی و یوکاریوتی نیز بررسی کرد.

Keywords:

Radiation resistant , drRRA gene , Deinococcus radiodurans , مقاومت به پرتو , ژن drRRA , داینوکوکوس رادیودورانس