تخلیص و تغلیظ ویروس هاری با استفاده از فیلتراسیون جریان مماسی (TFF) جهت تولید واکسن هاری دامی

زمینه مطالعه: جهت ساخت واکسن هاری دامی از سلول BHK-۲۱ و ویروس سویه پاستور استفاده می شود. اگرچه پروتکل های مختلفی برای خالص سازی در پروسه تولید واکسن پیشنهاد شده است لیکن این پروتکل ها اثرات منفی بر محصول نهایی دارند و نیازمند بهینه سازی می باشند.هدف: در مطالعه حاضر تلاش شد تا روش تغلیظ و خالص سازی ویروس مورد استفاده جهت ساخت واکسن هاری دامی بهینه سازی گردد.روش‎کار: ابتدا ویروس هاری سویه پاستور در سلول های BHK-۲۱ به مدت ۵ روز با کمکDMEM ، ۷ درصد سرم جنین گاوی کشت داده شد. سپس خالص سازی با استفاده از فیلتراسیون جریان مماسی (TFF) انجام شد. کیفیت ویروس های خالص سازی شده از طریق تیتراسیون ویروسی و الکتروفورز عمودی سنجیده شد. سپس غیرفعال شدن نمونه ها توسط بتاپروپیولاکتون انجام و در شرایط درون تنی و برون تنی مورد بررسی قرارگرفت. در نهایت، قدرت و کارایی واکسن فرموله شده با روش NIH مورد ارزیابی قرار گرفت.نتایج: مطالعه تیتراسیون ویروسی در نمونه های TFF نشان دهنده افزایش تیتر ویروسی در مقایسه با گروه کنترل بود (۰۵/۰P<). تجزیه و تحلیل ژل الکتروفورز عمودی نمونه های خالص شده و تغلیظ شده نشان دادند ویروس هایی که با استفاده از TFF خالص سازی و تغلیظ شده بودند در مقایسه با نمونه های تغلیظ نشده از خلوص بیشتری برخوردارند. علاوه بر این، در مطالعه ارزیابی قدرت و پتانسی واکسن افزایش ۱۰ برابری قدرت و کارایی واکسن نیز مشهود بود.نتیجه­گیری نهایی: مطالعه حاضر نشان داد که استفاده از روش TFF برای حجم بالای مایع ویروسی جهت تغلیظ و تخلیص بسیار مناسب است و قابلیت اجرا در مقیاس صنعتی جهت افزایش میزان قدرت و کارایی واکسن تولید شده را دارد.

Keywords:

ویروس هاری , تخلیص , فیلتراسیون جریان مماسی (TFF) , قدرت و کارایی واکسن , واکسن