بررسی مولکولی ژن های مقاومت تتراسایکلین در باکتری شیگلا سونئی جدا شده از نمونه بالینی و اثر عصاره علف چشمه (Nasturtium officinal) بر بیان ژن مقاومت به روش Real time- PCR

مقدمه: شیگلا (Shigella) باسیل گرم منفی روده ای که عفونتهای ناشی از آن مشکلات جدی را در کشورهای پیشرفته و در حال توسعه ایجاد کرده است. شیوع عفونتهای ناشی از شیگلا به دلیل دوز پایین بیماریزایی این باکتری و همچنین انتقال آسان آن از فردی به فرد دیگر و نیز آلوده شدن غیرمستقیم افراد از طریق مصرف مواد غذایی و آب آلوده بسیار آسان است.  جداسازی شیگلا سونئی از مدفوع کودکان, تاثیر و جداسازی عصاره گیاه علف چشمه, جدا سازی مولکولی ژن های تتراسایکلین با روش مالتی پلکس PCR و  تاثیر عصاره بر بیان ژن مقاومت تتراسایکلین باروش مالتی پلکس PCR است.روش کار: از تعداد ۶۰ سوش شیگلا سونئی جدا شده از کودکان مبتلا به اسهال پس از ایزولاسیون سویه ها بر روی محیط های افتراقی و محیط  کشت (MAC) MacConkey Agar از نظر شکل و رنگ کلنی ها بررسی و ثبت شد. ابتدا DNA ی هر یک از نمونه­ ها توسط کیت استخراج DNA استخراج شد و پس از استخراج نسبت به تکثیر DNA الگو به روش PCR اقدام ­شد. برای بررسی اثر مقاومت آنتی بیوتیکی گیاه علف چشمه نسبت به ژن استخراج شده مقاوم به داروی تتراسایکلین، MIC عصاره گیاه بر روی غلظت های مختلف باکتری شیگلا سونئی بررسی شد. از سویه هایی که واجد ژن های مقاوم به تتراسیکلین می باشند با در نظر گرفتن  MIC، با استفاده دو گروه تیمار و غیر تیمار، پس از انکوباسیون ۱۸ ساعته stationary lag log با استفاده از کیت استخراج RNA x plus استخراج RNA انجام شد. سپس با استفاده از دستگاه RT-PCR ABI plus  میزان بیان ژنtet A  و tet B در دو گروه تیمار و غیرتیمار تحت تاثیر عصاره گیاه علف چشمه بصورت کمی (عددی) CT خوانده شد و بیان ژن تحت تاثیر تیمار، تفسیر گردید.نتایج: نتایج ایزوله شیگلا سونئی درصد بالایی از بیشترین مقاومت به استرپتومایسین، نالیدیکسیک اسید، تتراسایکلین و آمپی سیلین و کلرامفنیکل با ۱۰۰%، ۱۰۰%، ۷/۸۶% و ۸/۹۱% % و ۵۰ % مشاهده شد. هم چنین بیشترین حساسیت به جنتامایسین و سیپروفلوکساسین با ۸۵% و ۶/۸۶% مشاهده شد. نتایج PCR چند گانه نشان داد که، از تمامی ۶۰ ایزوله شیگلا سونئی ، ۳ ایزوله فقط دارای ژن tetB (۵%)، ۵۵ ایزوله دارای ژن tetA (۶/۹۱%)، بودند. نتایج حاصل از آزمون فیشر حاکی از آنست که در سطح خطای ۵ درصد ارتباط معناداری بین ژنهای tetA و مقاومت به آنتی­بیوتیک­ها وجود داشته است(۰۵/۰p-value <).  نتایج حاکی از آن بود که در سطح خطای ۵ درصد ارتباط معناداری بین ژنهای tetB با مقاومت به آنتی­بیوتیک­ها وجود نداشته است(۰۵/۰p-value =). نتایج حاکی از آن بود که در سطح خطای ۵ درصد ارتباط معناداری بین ژنهای مثبت و منفی کلیه ژنها با مقاومت به آنتی­بیوتیک­ها وجود نداشته است(۰۵/۰p-value <).نتیجه گیری: در نتیجه آنکه مقاومت چندگانه در ایزوله های شیگلا به اکثر آنتی بیوتیک ها از جمله تتراسایکلین، کرامفنیکل، آمپی سیلین، کوتریموکسازول، نالیدیکسیک اسید و فلوروکینولون ها و هم چنین سفالوسپورین های نسل سوم در نقاط مختلف جهان رو به افزایش است. پارامتر Fold change نیز بیانگر میزان Fold change   گروه تیمار نشده نسبت به گروه تیمار شده می باشد. میزان Fold Change برای ژن tetA برابر ۲۱/۱- که نشان می دهد این ژن در گروه تیمار شده با عصاره گیاه علف چشمه نسبت به گروه غیر تیمار شده ۲۱/۱برابر کاهش یافته است.

Keywords:

درمان پاسخ محور , درمان ذهن خوانی , مهارت اجتماعی , اوتیسم