امین الله طهماسبی - دانشجویان دکتری، مرکز تحقیقات ویروس شناسی گیاهی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه شیراز.
علیرضا افشاریفر - دانشیار مرکز تحقیقات ویروس شناسی گیاهی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه شیراز
سمیرا ربیعی - دانشجویان دکتری، مرکز تحقیقات ویروس شناسی گیاهی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه شیراز.
کرامت ایزدپناه - استاد مرکز تحقیقات ویروس شناسی گیاهی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه شیراز.

در سال­های اخیر نقش اتوفاژی در خاموشی آر­ان­ای القاء شده توسط ویروس از طریق فعالیت پروتئین­های سرکوبگر خاموشی آر­ان­ای به اثبات رسیده است. به منظور درک بهتر نقش احتمالی سرکوبگر خاموشی HC-Pro ویروس ای سیب ­­زمینی در فرآیند اتوفاژی (autophagy)، اثر این سرکوبگر ویروسی روی بیان تعدادی از ژن­های مهم و دخیل در اتوفاژی مورد بررسی قرار گرفت. ژنHC-Pro  ویروس ای سیب ­­زمینی در ناقل بیان pGWB۱۷ با برچسبmyc  در انتهای کربوکسیلی و پروموتور ۳۵S در انتهای آمینی توسط تکنولوژی  gatewayهمسانه­سازی شد. کشت­های اگروباکتریوم حاوی  HC-Proویروس ای سیب ­زمینی با استفاده از سرنگ در ناحیه پشتی برگ­های گیاه Nicotiana benthamianaتزریق شدند. بیان ژن­های ATG۲، ATG۷،  ATG۶و AGO۱در پاسخ به سرکوبگر خاموشی HC-Pro ویروس ای سیب ­زمینی، در فاصله زمانی پنج روز پس از تزریق، با استفاده از تکنیک ریل تایم پی­سی­آر (Real-Time PCR) اندازه­گیری شدند. سرکوبگر خاموشیHC-Pro   ویروس ای سیب ­زمینی میزان بیان ژن­های ATG۶، ATG۲و ATG۷را به میزان ۸۹/۵، ۳/۷ و ۶/۷ برابر نسبت به برگ­های تزریق شده با سازه حاوی پلاسمید خالی pGWB افزایش داد. در حالی­که میزان رونوشت  AGO۱به­عنوان جزء کلیدی کمپلکس خاموشی القاء شده توسط آر­ان­ای، به میزان ۳۶/۱ برابر نسبت به میزان آن در برگ­های فاقد  HC-Proکاهش نشان داد. نتایج این تحقیق حاکی از دخالت ژن­های ATG۲، ATG۷، ATG۶و AGO۱در پاسخ­های دفاعی گیاه  N .benthamianaدر مقابل سرکوبگر خاموشی HC-Pro ویروس ای سیب­ زمینی و امکان استفاده از آن در تدوین روش­های جدید مدیریت ویروس­های گیاهی می­باشد.

اتوفاژی, سرکوبگر خاموشی, HC-Pro, Nicotiana benthamiana, خاموش سازی آر ان ای