کلونینگ آنزیم فیتاز پنیوفورا لایسی حاوی برچسب هیستیدین در مخمر

سابقه و هدف: فیتیک اسید، یکی از ترکیبات معدنی بسیار مهمی است که در درون گیاهان ذخیره می شود. فیتاز ( E.C. ۳.۱.۳.۸ یا E.C. ۳.۱.۳.۲۶ ) به صورت گسترده ای به عنوان یک افزودنی جهت افزایش جذب فسفر و سایر عناصر در حیوانات تک معده ای به غذای آنها اضافه شده و بدین ترتیب سبب کاهش دفع فسفات به داخل محیط می گردد. در این تحقیق، کلونینگ و افزودن برچسب شش آمینواسیدی هیستیدین به ژن نوترکیب فیتاز در باکتری اشرشیا کلی و سپس مخمر، به منظور خالص سازی آنزیم تولید شده در مقادیر بالا در این میزبان، انجام شد. مواد و روش ها: توالی پروتئینی آنزیم فیتاز قارچ P. lycii از بانک های اطلاعاتی پروتئین استخراج شده و با توجه به ترجیح کدنی مخمر ، توالی ژن طراحی و سنتز گردید. با طراحی پرایمرهای مناسب توالی حاوی شش هیستیدین به ژن مورد نظر داخل حامل دوگانه­ی pFPMTMF ۱۴α'> اضافه شده و در نهایت با استفاده از الکتروپوریشن به داخل مخمر انتقال یافت. یافته ها: سازه ی نوترکیب حاوی ژن فیتاز به همراه برچسب شش آمینواسیدی هیستیدین تولید شد. حضور ژن در داخل باکتری و مخمر با استفاده از روش های هضم آنزیمی و PCR تایید گردید. نتیجه­گیری: کلونینگ موفق ژن فیتاز قارچی حاوی برچسب شش هیستیدین، در باکتری اشرشیاکلی و مخمر به منظور بیان بالا و سپس خالص سازی این آنزیم، انجام شد.

Keywords:

Phytic acid , Phytase , Hexahistidine-tag , Cloning and yeast , فیتیک اسید , فیتاز , برچسب هیستیدین , کلونینگ و مخمر