طراحی، ساخت، و ارزیابی کارایی سازه CRISPR-Cas۹ برای ویرایش ژن EPSPS گوجه فرنگی
Publish place: 17th National Congress and 3rd International Congress of Agricultural Sciences and Plant Breeding of Iran
Publish Year: 1400
نوع سند: مقاله کنفرانسی
زبان: Persian
View: 230
This Paper With 5 Page And PDF Format Ready To Download
- Certificate
- من نویسنده این مقاله هستم
استخراج به نرم افزارهای پژوهشی:
شناسه ملی سند علمی:
NABATAT17_044
تاریخ نمایه سازی: 23 اسفند 1400
Abstract:
در این مطالعه از فناوری ویرایش ژنوم CRISPR-Cas۹ برای ویرایش ژن EPSPS گوجه فرنگی به منظور افزایش مقاومت بهعلف کش گلایفوسیت استفاده شد. sgRNA بر اساس ناحیه ۷۴۸ تا ۷۸۸ ژن EPSPS گوجه فرنگی طراحی شد. بر اساسسیستم کلونینگ گلدن گیت در مرحله اول سازه AtU۶::EPSPS_sgRNA و در مرحله دوم سازه pSlEPSPS-۳۵S::Cas۹-AtU۶::EPSPS_sgRNA ساخته شد. بر اساس تکثیر با PCR و هضم با آنزیم محدود کننده و توالی یابی صحت سازهpSlEPSPS-۳۵S::Cas۹-AtU۶::EPSPS_sgRNA تایید گردید. جهت بیان موقت این سازه در گوجه فرنگی رقم موبیل ازترنسفکشن پروتوپلاست استفاده شد. استخراج پروتوپلاست از لوکول میوه نارس گوجه فرنگی صورت گرفت و سازهpSlEPSPS-۳۵S::Cas۹-AtU۶::EPSPS_sgRNA ترنسفکت شد. همچنین از پروتوپلاستهای ترنسفکت شده DNAاستخراج شد. ناحیه هدف توسط PCR تکثیر و واکنش هضم با آنزیم HincII انجام شد و نتیجه مورد نظر حاصل گردید.
Keywords:
Authors
رخشنده ابراهیم پور
فارغ التحصیل مقطع کارشناسی ارشد در رشته مهندسی کشاورزی بیوتکنولوژی کشاورزی
علیرضا سیفی
عضو هیئت علمی گروه بیوتکنولوژی و بهنژادی گیاهی دانشکده کشاورزی دانشگاه فردوسی مشهد