استفاده از روش PCR رقابتی و Real-time PCR مطلق به منظور کمی سنجی جمعیت باکتری تولید کننده بوتیرات: بوتیریویبریو فیبری سالونس
Publish place: Iranian Journal of Animal Science Research، Vol: 7، Issue: 4
Publish Year: 1394
نوع سند: مقاله ژورنالی
زبان: Persian
View: 175
This Paper With 6 Page And PDF Format Ready To Download
- Certificate
- من نویسنده این مقاله هستم
استخراج به نرم افزارهای پژوهشی:
شناسه ملی سند علمی:
JR_JASR-7-4_008
تاریخ نمایه سازی: 25 اسفند 1400
Abstract:
سویه های باکتری بوتیریویبریو فیبری سالونس به عنوان عمده ترین گروه باکتری های تولید کننده بوتیرات در دستگاه گوارش بسیاری از حیوانات و همچنین انسان شناخته شده اند. در این مطالعه دو تکنیک مبتنی بر DNA شامل PCR رقابتی و Real-time PCR به منظور شمارش باکتری های گونه بوتیریویبریو فیبری سالونس استفاده شدند. در ابتدا آغازگرهای اختصاصی برای منطقه ۱۶S rDNA باکتری بوتیریویبریو فیبری سالونس به منظور تکثیر یک قطعه ۲۱۳ جفت بازی استفاده شدند. یک قطعه رقابتگر با تفاوت طول ۵۰ جفت باز بیشتر ساخته شد و در ناقل پلاسمیدی pTZ۵۷R/T همسانه سازی شد. کمیت رقابتگر پلاسمیدی با استفاده از نانودراپ اسپکتروفتومتری سنجیده شد و به صورت سریالی رقیق سازی شد. رقت های حاصل به همراه DNA استخراج شده از مایع شکمبه بطور همزمان تکثیر شدند. به منظور کمی سازی محصولات PCR پس از عکس برداری از ژل آگارز و استفاده از نرم افزار ImageJ ، مقادیر تکثیر شده از DNA هدف در مقابل مقادیر تکثیر شده از رقابتگر به صورت لگاریتمی ترسیم شدند. از ضریب تبیین (R۲) به عنوان معیاری جهت ارزیابی دقت تکنیک استفاده گردید. برای توسعه Real-time PCR، قطعه ۲۱۳ جفت بازی تکثیر شده و همسانه سازی شده در ناقل پلاسمیدی pTZ۵۷R/T به منظور رسم منحنی استاندارد استفاده شد. نتایج نشان دادند که هر دو روش قابلیت استفاده برای شمارش باکتری های جنس بوتیریویبریو فیبری سالونس را دارا هستند و بنابراین می توانند به عنوان ابزارهای مناسب در تحقیقات مرتبط با این باکتری مورد استفاده قرار بگیرند.
Keywords:
Authors
مجتبی طهمورث پور
دانشگاه فردوسی مشهد
امیر طاهری قهفرخی
دانشگاه فردوسی مشهد
محمدهادی سخاوتی
دانشگاه فردوسی مشهد
مراجع و منابع این Paper:
لیست زیر مراجع و منابع استفاده شده در این Paper را نمایش می دهد. این مراجع به صورت کاملا ماشینی و بر اساس هوش مصنوعی استخراج شده اند و لذا ممکن است دارای اشکالاتی باشند که به مرور زمان دقت استخراج این محتوا افزایش می یابد. مراجعی که مقالات مربوط به آنها در سیویلیکا نمایه شده و پیدا شده اند، به خود Paper لینک شده اند :