بهبود روش باززایی و انتقال ژن به گیاه زینتی بنفشه آفریقایی در شرایط کشت درون شیشه ای

بنفشه آفریقایی یک گیاه زینتی تجاری با رنگ های مختلف است. به منظور باززایی مستقیم، این گیاهچه، ابتدا در آزمایش اول که به صورت آزمایش فاکتوریل در قالب طرح به طور کامل تصادفی اجرا شد. اثر ریزنمونه های برگ، گره، دمبرگ، ریشه، گلبرگ و کاسبرگ در چهار رقم در محیط کشت MS حاوی غلظت های مختلف هورمون های NAA + BAP وIBA + BAP برای تولید شاخساره بررسی شد. سپس در آزمایش دوم آستانه تحمل ریزنمونه های برگ و دمبرگ به آنتی بیوتیک های هیگرومایسین و کانامایسین با کشت در محیط کشت های انتخابی دارای غلظت های مختلف از این دو آنتی بیوتیک ارزیابی گردید. پس از مشخص شدن غلظت مناسب آنتی بیوتیک برای محیط کشت انتخابی، انتقال ژن های AS۱ و ۴'CGT به ترتیب با استفاده از آگروباکتریوم سویه LBA۴۴۰۴ حاوی پلاسمید های pCAMBIA۱۳۰۴ وpBI۱۲۱  انجام شد. از روش واکنش زنجیره ای پلی مراز برای شناسایی گیاهان تراریخته استفاده شد. نتیجه های آزمایش اول مشخص نمود که ریزنمونه برگ مناسب ترین ریزنمونه و محیط کشت حاوی یک میلی گرم بر لیتر IBA و BAP در هر چهار رقم، بهترین ترکیب بود. نتیجه های آزمایش دوم نشان داد که محیط M۴ ( به ترتیب حاوی ۵۰ و ۷۵ میلی گرم در لیتر کانامایسین و هیگرومایسین) به طور کامل از باززایی نمونه های غیرتراریخت جلوگیری می کند. در انتها گیاهان تراریخته با استفاده از آغازگرهای اختصاصی ژن های مورد آزمایش انتخاب شدند.

Keywords:

African violet , Explants , Genetic manipulation , Directs branching , Tissue culture. , بنفشه آفریقایی , ریزنمونه , دست ورزی ژنتیکی , شاخه زایی مستقیم , کشت بافت