شیلا فلسفی - Department of Biochemistry, Pharmaceutical Sciences Branch, Faculty of New Technologies, Islamic Azad University, Tehran, Iran.
جعفر امانی - Applied Microbiology Research Center, Systems Biology and Poisonings Institute, Baqiyatallah University of Medical Sciences, Tehran, Iran
سیدعلی میرحسینی - Applied Microbiology Research Center, Systems Biology and Poisonings Institute, Baqiyatallah University of Medical Sciences, Tehran, Iran

سابقه و هدف باکتری اشرشیاکلی انتروهموراژیک (Enterohemorrhagic E. coli) سویه­ی O۱۵۷:H۷ یک پاتوژن مهم انسان و حیوان است که در انسان موجب بروز اسهال خونریزی دهنده و سندروم اورمی همولیتیک می شود. اتصال به سلول­های میزبان اولین گام در تثبیت این باکتری است که به واسطه­ی سیستم ترشحی نوع  (T۳SS) III و از طریق میان­کنش بین پروتئین­های ترشحی صورت می­گیرد. Tir پروتئینی است که پس از بیان در باکتری و از طریق  T۳SS به سلول میزبان منتقل و در غشای آن مستقر می شود و نقش مهمی در اتصال باکتری به میزبان دارد. هدف از این تحقیق ساخت سازه ژنی است که دارای فاکتورهای ویرولانس Tir می­باشد. مواد و روش­ ها: :  طراحی پرایمر اختصاصی برای ژن tir با استفاده از نرم افرازOligo  انجام شد و تکثیر ژن به وسیله واکنش    PCRاز روی DNA الگو صورت گرفت. پس از واکنش­های هضم آنزیمی و الحاق ژن درون ناقل بیانی pET۲۸a  ، انتقال ناقل به درون میزبان بیانی انجام شد. پس از تایید همسان­سازی ژن، بیان نوترکیب پروتئین   Tirبا استفاده از القاگر IPTG  صورت گرفت. برای تایید پروتئین Tir  آنالیز وسترن بلات انجام شد.  یافته ها: : همسان سازی ژن tir درون وکتور pET۲۸a به شکل مناسب بین جایگاه­های مطلوب انجام شد و پروتئین Tir پس از القا، پروتئین نوترکیب بیان  مناسب و قابل توجهی نشان داد. آنتی بادی مورد استفاده در وسترن بلات نیز توانست به شکل مناسبی Tir را شناسایی کند. نتیجه گیری: در این مطالعه، سازه پایدار محتوی ژن tir ساخته شد که بیان نوترکیب قابل توجهی از پروتئین Tir را از خود نشان داد. بنابراین این سازه را می توان برای تولید پروتئین Tir جهت مطالعات ایمنی زایی علیه E.coli O۱۵۷:H۷  به کاربرد..  

E.coli O۱۵۷: H۷, Recombinant protein, Cloning, Tir, Iau Science., اشرشیاکلی O۱۵۷:H۷, پروتئین نوترکیب, همسان سازی, Tir, . Iau Science