تشخیص مولکولی سیانوباکتری های تولیدکننده ساکسی توکسین در خلیج فارس

زمینه و هدف: سیانوباکترها میکروارگانیسم هایی هستند که در تمام پهنه های آبی یافت می شوند و برخی از آنها با شکوفایی تحت شرایط خاص مانند درجه حرارت آب و یوتروف بودن پهنه آبی در پدیده کشند قرمز در اکوسیستم های دریایی دخالت داشته که از این میان تعدادی سمی بوده و تعادل اکوسیستم را به مخاطره می اندازند. یکی از سموم مهم سیانوباکتری ها که بر سیستم عصبی و دستگاه تنفسی تاثیر میگذارد، ساکسی توکسین میباشد. هدف از این پژوهش، تشخیص سریع ملکولی سیانوباکترهای مولد سم ساکسی توکسین در هرمزگان-خلیج فارس با روش PCR بوده است. روش تحقیق: در اوایل فصل پاییز سال ۱۳۹۲ در ۲۰ ایستگاه واقع در سه ناحیه مانگرو ( خور تیاب )، مرجانی ( جزیره لارک ) و منطقه حد واسط به دو صورت فیکس شده ( با فرمالین ۲ درصد ) و فیکس نشده ( انتقال روی یخ ) نمونه گیری بعمل آمد. نمونه ها بلافاصله در شرایط سرد به لابراتوار منتقل و به روش DNG تغییریافته، DNA استخراج گردید. تست PCR با استفاده از DNA سوش استاندارد توکسوژن AWQC۱۳۱C Anabeana circinalis اپتیمایز گردید و سپس از جهت ویژگی و حساسیت بررسی شد. آمپیلیکون به روش T/A Cloning در پلاسمید PTZ۵۷R به جهت توالی و تهیه کنترل مثبت، کلون گردید.یافته ها: تست PCR اپتیمایز شده و محصول ۶۰۲bp با استفاده از سوش استاندارد تکثیر گردید. آمپیلیکون کلون و پلاسمید pSASXT ساخته شد و سکانس ژن تعیین گردید. در بررسی ویژگی، با هیچ یک از DNA های سیانوباکترها ی tox- و سایر ارگانیسم ها محصولی تکثیر نگردید. علاوه بر آن حساسیت در حد ۱۰ کپی از ژنوم تایید شد. بر این اساس از ۲۰ ایستگاه نمونه برداری ، در ۹ ایستگاه (۴۵%)، سیانوباکترهای مولد سم (بطور بالقوه) مشاهده گردید. همچنین روش های مولکولی مانند PCRدر این مطالعه با استفاده از پرایمرهای Universal و اختصاصی، تکنیک مناسبی به جهت ارزیابی شناسایی سیانوباکترهای مولد سم ساکسی توکسین در پهنه های مختلف آبی می باشد. بعلاوه در این مطالعه با استفاده از پارامترهای مورفولوژیک با کلید شناسایی روش میکروسکوپی به شناسایی سیانوباکترهای موجود در ایستگاههای نمونه برداری شده پرداخته شده است. نتایج حاصل نشان داد که درتمامی ایستگاهها سیانوباکتری ها حضور داشته است.نتیجه گیری: توجه به موقعیت ایستگاههایی که تست PCR در آنها ،حضور ژن سیانوباکترهای مولد سم ساکسی توکسین را تایید کرده است، میتوان نتیجه گیری نمود که نواحی خورهااز جمله خورهای تیاب، دارسرخ و جلابی، حاوی سیانوباکترهای مولد سم ساکسی توکسین می باشند.

Keywords:

سیانوباکتر , ساکسی توکسین , PCR , خلیج فارس , هرمزگان , ایران