بررسی تنوع ژن 16s rDNA لاکتوباسیلوس های موجود در محصولات لبنی سنتی منطقه کلیبر ، اهر و ماکو آذربایجان با استفاده از تکنیک ARDRA

یکی از منابع مهم باکتریهای اسید لاکتیک محصولات لبنی تخمیری مانند ماست و پنیر سنتی می باشد . لاکتو باسیلها از مهم ترین جنس های شناخته شده باکتری های اسید لاکتیک در تولید ترکیبات معطر و ایجاد طعم و مزه در محصولات لبنی هستند. این باکتری ها متداولترین نوع باکتری هایی هستند که به عنوان پروبیوتیک معرفی می شوند. هدف از این تحقیق بررسی تنوع ژن 16s rDNA لاکتو باسیلوسهای موجود در لبنیات سنتی به روش ARDRA 21 می باشد. این تحقیق بر روی 30 ایزوله جمع آوری شده از محصولات لبنی سنتی از منطقه آذر بایجان شرقی در پژوهشکده بیو تکنولوژی کشاورزی شمال غرب و غرب کشور با استفاده از روش ARDRA انجام شد . این تکنیک بر اساس تکثیر ژن ریبوزومال باکتری و انجام برش آنزیمی استوار می باشد که تفاوت الگوی برش آنزیمی این ژن نشان از تنوع گونه ای باکتری می باشد.ابتدا برای تایید جنس ایزوله ، تکثیر قطعه توسط پرایمر های اختصاصی ژن 16s rDNA طراحی شده برای جنس لاکتوباسیل انجام گرفت سپس از 2 آنزیم برشی TaqI و MspI که بر اساس جایگاه برشی موجود در توالی های ثبت شده در Gene bank انتخاب شده بود برای هضم آنزیمی و بررسی ایزوله ها در حد گونه استفاده شد . الگوی نواری حاصل از برش آنزیمی با الگوی نواری به دست آمده از نرم افزار Gen doc مقایسه شد. باند حاصله در واکنش PCR به اندازه 1500 جفت نوکلئوتید بود که با اندازه ژن مطابقت دارد. آنالیز ها نشان داد که لاکتو باسیلوس های جدا سازی شده الگوی برشی مشابهی را با لاکتو باسیلوس های پلانتاروم، فرمنتوم، کازئی، سیک و آژیلس دارند. با توجه به اینکه حجم نمونه زیادی برای بررسی دقیق تنوع گونه ای لازم می باشد و آماده سازی و توالی یابی این حجم نمونه هزینه بر و زمان بر می باشد لذا جهت رفع این مشکل می توان از روش ARDRA استفاده نمود. نتایج این تحقیق نشان داد که این روش از کارایی لازم جهت تعیین گونه برخوردار می باشد.

Keywords:

لاکتو باسیلوس , محصولات لبنی , ARDRA