تهیه آنتی بادی چند همسانه ای نوترکیب علیه ویروس لکه برگی کلروتیک سیب و بررسی کارایی آن
عنوان مقاله: تهیه آنتی بادی چند همسانه ای نوترکیب علیه ویروس لکه برگی کلروتیک سیب و بررسی کارایی آن
شناسه ملی مقاله: JR_GEB-12-1_006
منتشر شده در در سال 1402
شناسه ملی مقاله: JR_GEB-12-1_006
منتشر شده در در سال 1402
مشخصات نویسندگان مقاله:
مریم افراشته - University of Zanjan
داود کولیوند - University of Zanjan
محمد حاجی زاده - Department of Plant Protection, Faculty of Agriculture, University of Kurdistan, Sanandaj, Iran
ناهید مسعودی - University of Guilan
خلاصه مقاله:
مریم افراشته - University of Zanjan
داود کولیوند - University of Zanjan
محمد حاجی زاده - Department of Plant Protection, Faculty of Agriculture, University of Kurdistan, Sanandaj, Iran
ناهید مسعودی - University of Guilan
یکی از ویروسهای مهم آلوده کننده درختان میوه، ویروس لکه برگی کلروتیک سیب (Apple chlorotic leaf spot virus, ACLSV است. تهیه آنتیبادی و طراحی کیت الایزا و بیوسنسورها یکی از راهبردهای مفید در تشخیص زود هنگام عوامل بیماری زا در نمونههای با تعداد زیاد است. در همین راستا، تحقیق حاضر با هدف تولید آنتی بادی چندهمسانهای نوترکیب و طراحی کیت الایزا جهت ردیابی سریع ویروس لکه برگی کلروتیک سیب با استفاده از بیان در سیستم پروکاریوتی انجام شد. ابتدا، سازه pTG۱۹-ACLSV-CP به باکتریEscherichia coli سویه DH۵α منتقل و پس از تکثیر و استخراج پلاسمید نوترکیب، ژن پروتئین پوششی با استفاده از آنزیمهای برشی خارج و درون پلاسمید بیان pET۲۸(a) همسانه سازی گردید. سازه بیان pET۲۸-ACLSV-CP ساخته شده به منظور بیان پروتئین، به باکتری E. coli سویه BL۲۱(DE۳) منتقل شد. پس از بهینه سازی، بیان و استخراج پروتئین پوششی، نوار پروتئینی با اندازه تقریبی ۲۷ کیلودالتون چهار ساعت بعد از القاء مشاهده شد. سپس، پروتئین بیان شده به روش طبیعی با ستون Ni-NTA Agarose، خالص سازی انجام شد. پروتئین خالص شده، به عنوان آنتی ژن به خرگوش ماده نژاد نیوزیلندی طی چهار مرحله تزریق شد. ایمنوگلوبولینها با استفاده از کیت تخلیص IgG مبتنی بر پروتئین A از سرم خون به دست آمده از خرگوشهای ایمن شده تخلیص شدند. کارایی ایمنوگلوبولین های خالص شده، نشان داد که کاربرد غلظت ۱:۱۰۰۰ آنتی بادی نوترکیب تهیه شده و نشاندار برای ردیابی آنتی ژن های موردنظر مناسب هستند. نتایج حاکی از تولید آنتی بادی با اختصاصیت مناسب جهت ردیابی ویروس لکه برگی کلروتیک سیب و کارایی آنتی بادیها تولید شده برای شناسایی این ویروس برای غربال نهالها و باغات است.
کلمات کلیدی: ACLSV, Polyclonal antibody, IgG, ELISA., : لکه برگی کلروتیک سیب, آنتی بادی چند همسانه ای, ایمونوگلوبولین گاما, الایزا.
صفحه اختصاصی مقاله و دریافت فایل کامل: https://civilica.com/doc/1784182/