علیرضا مردمی - PhD in Immunology, Immunogenetics Research Center, Mazandaran University of Medical Sciences, Sari, Iran
سعید عابدیان کناری - Professor, Immunogenetics Research Center, Department of Immunology, Mazandaran University of Medical Sciences, Sari, Iran

سابقه و هدف: روش های متفاوتی برای تشخیص مولکولی ژنوم ویروس کرونا معرفی شده است که روش های مبتنی بر تکثیر ژنوم از موثرترین تست ها برای تشخیص ویروس هستند. از آنجایی که اکثر کیت های تایید شده PCR برای تشخیص ویروس کرونا بر پایه TaqMan real time PCR هستند که به دلیل استفاده از پروب های حاوی فلئورسنت و کوئینچر هزینه تمام شده بالایی دارند. لذا، هدف از این مطالعه طراحی روشی ارزان و ساده برای تشخیص ژنوم ویروس کرونا براساس تست کمی PCR- SYBR green برای ژن نوکلئوکپسید ویروس بوده است. مواد و روش ها: پرایمرهای اختصاصی برای ژن نوکلئوکپسید ویروس و نیز ژن کنترل انسانی به وسیله نرم افزار Oligo طراحی شد و از نظر اختصاصیت به وسیله قابلیت Primer-BLAST پایگاه NCBI مورد بررسی قرار گرفتند. نمونه های سواب بینی از ۱۰ بیمار کرونایی تایید شده به وسیله PCR و نیز ۱۰ فرد کنترل دریافت گردید و وارد مطالعه شدند. یافته ها: واکنش های طراحی شده با انطباق کامل با کیت مورد تایید وزارت بهداشت عمل افتراق افراد سالم از افراد بیمار انجام گرفت به طوری که Cut-off برای Ct واکنش برای جفت پرایمر N۱ برابر با ۷۲/۳۹ و برای جفت پرایمر N۲، ۶۹/۳۹ محاسبه گردید. استنتاج: واکنش طراحی شده براساس SYBR green real time PCR پتانسیل شناسایی ژنوم ویروس کرونا در نمونه های بالینی را از خود نشان داد و این روش در صورت طراحی مناسب پرایمرها و شرایط استاندارد واکنش می تواند به عنوان جایگزین کم هزینه تری برای روش TaqMan real time PCR مطرح گردد.

COVID-۱۹, Real-time PCR, specific primers, کرونا, واکنش زنجیره ای پلیمراز, پرایمر اختصاصی