مائده رمضان پور - MSc Student in Genetic, Faculty of Biology, Islamic Azad University, Tehran Medical branch, Tehran, Iran
پونه رحیمی - Associate Professor, Department of Hepatitis and AIDS, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran
مهرداد هاشمی - Associate Professor, Department of Biology, Faculty of Biology, Islamic Azad University, Tehran Medical branch, Tehran, Iran
سیدمهدی سادات - Assistant Professor, Department of Hepatitis and AIDS, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran

سابقه و هدف: در این پروژه، هدف کلی تحقیق طراحی و ساخت وکتور نوترکیب واجد ژن تمام طول Vpr ویروس نقص ایمنی اکتسابی انسانی (HIV-۱) با استفاده از وکتور pEGFP-N۱ بود. کلونینگ ژن Vpr قبلا درون وکتور pEGFP_N۱ صورت نگرفته بود. مواد و روش ها: وکتور pUC۱۹ دارای ژن تمام طول Vpr جهت تایید با استفاده از آنزیم های محدود کننده برش داده شد. سپس جهت اضافه کردن سایت های برش آنزیمی (XhoI, KpnI) در ژن مورد نظر مطابق با سایت های موجود در وکتور pEGFP-N۱ با طراحی پرایمر واکنش PCR بر روی ژن Vpr با استفاده از پلاسمید نوترکیب pUC۱۹-Vpr به عنوان الگو انجام گرفت. محصول پس از الکتروفورز، مورد استخراج از ژل قرار گرفته و تخلیص گردید. سپس هر دو محصول PCR و وکتور pEGFP-N۱ تحت واکنش هضم آنزیمی قرار گرفتند. در مرحله بعد، واکنش الحاق توسط آنزیم T۴ انجام گرفت و این ژن به درون وکتور pEGFP-N۱ کلون شده و به درون باکتری DH۵a ترنسفورم گردید. در نهایت سازه استخراج شده و با هضم آنزیمی و PCR مورد تایید قرار گرفت. یافته ها: در این پروژه ابتدا ژنVpr  درون وکتور pUC۱۹ پس از برش آنزیمی مورد تایید قرار گرفت. سپس این ژن به طور تمام طول و با قرار دادن توالی های برش از ۲ آنزیم محدودالاثر در طراحی پرایمرهای اختصاصی در واکنش PCR تکثیر داده شد و اندازه محصول در الکتروفورز مورد تایید قرار گرفت. محصول واکنش الحاق ژن Vpr به طور تمام طول در وکتور pEGFP-N۱ نیز هم در هضم آنزیمی و هم در PCR مورد تایید قرار گرفت. استنتاج: ساخت وکتور نوترکیب واجد ژن تمام طول Vpr ویروس نقص ایمنی اکتسابی انسانی با استفاده از وکتور pEGFP-N۱ با موفقیت انجام گرفت.

Human Immunodeficiency Virus-۱, Vpr gene, pEGFP-N۱, ویروس نقص ایمنی اکتسابی انسانی, ژن Vpr, وکتور pEGFP-N۱