تهیه سازه های مناسب به منظور بیان ژن اینترفرون گامای انسانی در Leishmania tarentolae
عنوان مقاله: تهیه سازه های مناسب به منظور بیان ژن اینترفرون گامای انسانی در Leishmania tarentolae
شناسه ملی مقاله: JR_DMED-20-3_003
منتشر شده در در سال 1391
شناسه ملی مقاله: JR_DMED-20-3_003
منتشر شده در در سال 1391
مشخصات نویسندگان مقاله:
نوشین داودی - مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی، انستیتو پاستور ایران
محمدمهدی عطارپور یزدی - گروه میکروب شناسی، دانشکده پزشکی، دانشگاه شاهد
اعظم همتی - انستیتو پاستور ایران
حسین سلطانی نژاد - انستیتو پاستور ایران
خلاصه مقاله:
نوشین داودی - مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی، انستیتو پاستور ایران
محمدمهدی عطارپور یزدی - گروه میکروب شناسی، دانشکده پزشکی، دانشگاه شاهد
اعظم همتی - انستیتو پاستور ایران
حسین سلطانی نژاد - انستیتو پاستور ایران
مقدمه و هدف: افزایش کاربردهای درمانی برای اینترفرون گامای انسانی نوترکیب (hrIFNg) که یک سایتوکین پیشالتهابی ضدویروسی است، موجب گسترش روشهای بهینهسازی تولید آن شدهاست؛ در این مطالعه، تولید این گلیکوپروتئین در سیستم یوکاریوتی تکسلولی Leishmania tarentolae که از مارمولک tarentolae annularis بهدستمیآید، برای بیان ژن هترولوگ مورد بررسی قرارگرفتهاست. مواد و روشها: بهمنظور تکثیر cDNA ژن IFNg از روش RT-PCR روی سلولهای تکهستهای خون محیطی تحریکشده با فیتوهماگلوتینین یک فرد ایرانی سالم استفادهشد و بهمنظور بیان پروتئین hrIFNg، cDNA تکثیرشده در دو کاست بیانی کلون شد. به نحوی که هر کاست بیانی دارای یک کپی از ژن hIFNg بود؛ این کاستهای بیانی با روش الکتروپوریشن در جایگاه ژن RNA ریبوزومی (ssu) L. tarentolae وارد شدند. پس از ترانسفورم، کلونهای ترانسفورمشده در حضور آنتیبیوتیکهای اختصاصی انتخابشدند. نتایج: سازههای مورد نیاز بیان اینترفرون گامای انسانی در سلولهای L. tarentolae تهیه و به داخل سلول انگل وارد شد و کارایی سازهها، با تکنیک وسترن بلات تاییدشد. نتیجهگیری: تاکنون انواع مختلفی از سلولهای پروکاریوتی و یوکاریوتی بهعنوان سیستمهای بیانی در تولید پروتئینهای نوترکیب استفادهشدهاند ولی به دلیل ویژگیهایی، اغلب در بیان این گلیکوپروتیین ناموفق بودهاند. سیستم بهکاررفته در این مطالعه از خصوصیاتی ویژه ازقبیل سرعت رشد بالا، شرایط کشت ارزان و گلیکوزیلاسیون مناسب گلیکوپروتیینها بهرهمند است که میتواند برای تولید پروتئین نوترکیب بهکاررود.
کلمات کلیدی: اینترفرون گامای انسانی نوترکیب, جایگاه ریبوزومی (ssu), لیشمانیا تارنتولی
صفحه اختصاصی مقاله و دریافت فایل کامل: https://civilica.com/doc/1800253/