تولید رده سلولی K۵۶۲ بیان کننده اندونوکلئاز Cas۹ (CRISPR-associated۹)
Publish Year: 1397
نوع سند: مقاله ژورنالی
زبان: Persian
View: 137
This Paper With 12 Page And PDF Format Ready To Download
- Certificate
- من نویسنده این مقاله هستم
استخراج به نرم افزارهای پژوهشی:
شناسه ملی سند علمی:
JR_BLOOD-16-1_005
تاریخ نمایه سازی: 29 آبان 1402
Abstract:
چکیده
سابقه و هدف
امروزه ژنوم رده های سلولی به منظور ایجاد مدل های بیماری و درمان آن ها ویرایش می شود. البته بزرگی ژن Cas۹ موجب مشکلاتی از جمله پایین بودن کارآیی سیستم CRISPR شده است. برای حل این مشکل، رده های سلولی بیان کننده Cas۹ تولید شده اند که در آن ها تنها باید بخش RNA راهنمای CRISPR به سلول ترانسفکت شود.
مواد و روش ها
در این مطالعه تجربی، قطعه PGK-PURO/CMV (PPC) با PCR از وکتور pAAVS۱-puro-DNR تکثیر شده و در وکتور pTG۱۹-Tهمسانه سازی شد. سپس قطعه PPC از این وکتور با آنزیم های KpnI و EcoRI خارج شد. وکتور pCas-Guide-AAVS۱ نیز تحت برش آنزیمی مشابه قرار گرفت و اتصال آن با قطعه PPC منجر به ساخت وکتور pPPC-Cas گردید. پس از بهینه کردن شرایط الکتروپوریشن، وکتور pPPC-Cas به درون سلول های K۵۶۲ الکتروپوریت شد و سلول های مقاوم به پرومایسین انتخاب شدند و میزان بیان Cas۹ در آن ها با Real-time PCR بررسی شد.
یافته ها
با PCR قطعه ای به طول ۲۵۱۴ جفت باز تکثیر شد. وکتورpPPC-Cas طی دو مرحله همسانه سازی ساخته شد. سلول های ترانسفکت شده مقاوم به پرومایسین انتخاب شدند. انتخاب کلونی در ادامه انجام شد و سه کلونی که نسبت به هم بیان های بالا، متوسط و پایین داشتند، انتخاب شدند.
نتیجه گیری
در این مطالعه سلول های K۵۶۲ بیان کننده Cas۹ به دست آمدند که از آن ها می توان در مطالعه های آتی ژنومیک عملکردی و نیز تولید مدل های سلولی بیماری های انسانی استفاده کرد.
Keywords:
Key words: Cell Line , Electroporation , Gene Editing , کلمات کلیدی: رده سلولی , الکتروپوریشن , ویرایش ژنی
Authors
فائزه انصاری
مرکز تحقیقات انتقال خون موسسه عالی آموزشی و پژوهشی طب انتقال خون
مهین نیکوگفتار ظریف
دانشیار مرکز تحقیقات انتقال خون موسسه عالی آموزشی و پژوهشی طب انتقال خون
امیرعلی حمیدیه
مرکز طبی کودکان دانشگاه علوم پزشکی تهران
مهدی شمس آرا
استادیار پژوهشکده زیست فناوری کشاورزی پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری
مراجع و منابع این Paper:
لیست زیر مراجع و منابع استفاده شده در این Paper را نمایش می دهد. این مراجع به صورت کاملا ماشینی و بر اساس هوش مصنوعی استخراج شده اند و لذا ممکن است دارای اشکالاتی باشند که به مرور زمان دقت استخراج این محتوا افزایش می یابد. مراجعی که مقالات مربوط به آنها در سیویلیکا نمایه شده و پیدا شده اند، به خود Paper لینک شده اند :