ایجاد جهش نقطه ای در اسید آمینه ۲۶۳ ژن استرپتوکیناز و کلونینگ و بیان پروتئین جهش یافته حاوی سیستئین
عنوان مقاله: ایجاد جهش نقطه ای در اسید آمینه ۲۶۳ ژن استرپتوکیناز و کلونینگ و بیان پروتئین جهش یافته حاوی سیستئین
شناسه ملی مقاله: JR_NBR-3-3_009
منتشر شده در در سال 1395
شناسه ملی مقاله: JR_NBR-3-3_009
منتشر شده در در سال 1395
مشخصات نویسندگان مقاله:
Mahsa Rezaee - دانشگاه آزاد واحد پیشوا ورامین
Fahimeh Baghbani Arani - دانشگاه آزاد واحد پیشوا ورامین
Reza Arabi Mianroodi - انستیتو پاستور
خلاصه مقاله:
Mahsa Rezaee - دانشگاه آزاد واحد پیشوا ورامین
Fahimeh Baghbani Arani - دانشگاه آزاد واحد پیشوا ورامین
Reza Arabi Mianroodi - انستیتو پاستور
استرپتوکیناز یکی از شناخته شده ترین عوامل ترومبولیتیک با مصرف بالینی گسترده است. با وجود این، کاربرد آن به دلیل ایمونوژن بودن، ایجاد عوارض هموراژیک و نیمهعمر نسبتا کوتاه، همراه با خطرهایی است. پگیلاسیون اختصاصی بر روی اسیدآمینه سیستئین، تکنیکی مفید جهت کاهش بسیاری از این عوارض است. هدف از مطالعه حاضر، طراحی و تولید مولکول استرپتوکیناز جهش یافته حاوی سیستئین است که برای پگیلاسیون اختصاصی قابل استفاده باشد. اسیدگلوتامیک ۲۶۳ استرپتوکیناز، که یک اسیدآمینه سطحی در ساختار پروتئین استرپتوکیناز است، برای انجام جهش و تعویض با سیستئین انتخابشد. برای نیل به این هدف، با به کارگیری روش SOEing PCR، جهش بر روی کدون GLU۲۶۳ ژن استرپتوکیناز برای تبدیل به کدون سیستئین انجام شد. سپس، ژن استرپتوکیناز دست نخورده و جهش یافته در وکتور بیانی pET-۲۶b (+) وارد شدند. ساختارهای حاصل درون اشریشیا کلی Rosetta (DE۳) ترنسفرم شده و توسط القا با IPTG بیان شدند. درنهایت، تولید پروتئین ها به وسیله آزمون های SDS-PAGE و وسترن بلاتینگ تایید شد. پروتئین ها به وسیله افینیتی کروماتوگرافی با ستون Ni-NTA agarose در شرایط دناتوره با اوره تخلیص شدند و برای حذف اوره و تاخوردگی مجدد پروتئین ها از فیلتراسیون ژلی با سفادکس G-۲۵استفاده شد. نتایج این مطالعه نشان داد که با استفاده از وکتور و میزبان مذکور ژن جهش یافته حاوی کدون سیستئین به خوبی بیان می شود و برای پگیلاسیون اختصاصی مناسب خواهد بود.
کلمات کلیدی: thrombolytic, PEGylation, glutamic acid, purification, ترومبولیتیک, پگیلاسیون, اسید گلوتامیک, تخلیص
صفحه اختصاصی مقاله و دریافت فایل کامل: https://civilica.com/doc/1835038/