مرضیه واثقی - Ph.D. in Aquatic Animal Health, Faculty of Veterinary Medicine, Shahid Chamran University of Ahvaz, Ahvaz, Iran
مجتبی علیشاهی - Professor in Department of Livestock, Avian and Aquatic Animal Health, Faculty of Veterinary Medicine, Shahid Chamran University of Ahvaz, Ahvaz, Iran
محمدرضا تابنده - Associate Professor in Department of Basic Sciences, Faculty of Veterinary Medicine, Shahid Chamran University of Ahvaz, Ahvaz, Iran
مسعود قربانپور - Professor in Department of Pathobiology, Faculty of Veterinary Medicine, Shahid Chamran University of Ahvaz, Ahvaz, Iran
محمد خسروی - Associate Professor in Department of Pathobiology, Faculty of Veterinary Medicine, Shahid Chamran University of Ahvaz, Ahvaz, Iran

باکتری Aeromonas hydrophila یکی از مهم ترین باکتری­های بیماری زای ماهی است که سبب سپتی سمی هموراژیک، آب آوردگی محوطه شکمی و مرگ و میر در سنین متفاوت و در گونه­های مختلف ماهی به ویژه کپورماهیان می­شود. ایمن سازی یکی از روش­های مناسب برای پیشگیری از این بیماری است. استفاده از سازه های ژنی حاوی آنتی ژن های اختصاصی باکتری ها در سال­های اخیر به منظور توسعه واکسن هایی با کارایی بالا و استفاده در روش های آسان تر مانند تجویز خوراکی در آبزی پروری توسعه یافته است. در مطالعه حاضر، پروتئین aopB سیستم ترشحی تیپ III باکتری A. hydrophila جدا شده از کپورماهیان استان خوزستان به منظور طراحی یک سازه ژنی مدل واکسن DNA در پلاسمید یوکاریوتی بیانی pCDNA۳.۱ همسانه سازی شد. در این پژوهش از جدایه­ باکتری A. hydrophila که از ماهیان کپور مبتلا به سپتی­سمی آئروموناسی در مزارع پرورشی استان خوزستان جداسازی و با روش مولکولی و فنوتیپی تایید شده بودند، استفاده شد. توالی ژن aopB از بانک ژن NCBI استخراج و ناحیه کد کننده ژن با استفاده از آغازگرهای حاوی نواحی برش آنزیم­های EcoRI و NheI تکثیر شد. سپس محصول PCR در پلاسمید بیانی یوکاریوتی pCDNA۳.۱-HisA الحاق و با استفاده از شوک حرارتی به باکتری TOP۱۰-F' انتقال داده شد. پس از غربالگری کلون­های مثبت با استفاده از کلونی PCR و تعیین توالی، سازه ژنی pCDNA۳.۱-AopB با استفاده از روش الکتروپوراسیون به سلول­های CHO منتقل و بیان پروتئین نوترکیب با استفاده از روش وسترن بلات در لیز سلولی ارزیابی شد. نتایج PCR و تعیین توالی سازه ژنی نشان دهنده همسانه سازی ژن aopB به طول تقریبی ۱۰۰۰ جفت باز در پلاسمید pCDNA۳.۱-HisA بود. آزمون وسترن بلات با استفاده از آنتی بادی ضد HisTag وجود یک پروتئین با وزن مولکولی حدود ۳۶ کیلودالتون را نشان داد. در مجموع، سازه ژنی pCDNA۳.۱-AopB حاوی ژن aopB طراحی و مورد تایید قرار گرفت. از این سازه ژنی می توان در مطالعات بالینی به منظور بررسی ایمنی زایی در کپورماهیان در بیماری زایی تجربی با A. hydrophila استفاده کرد.

Aeromonas hydrophila, aop-B, Gene structure, DNA vaccine