انتقال ژن توکوفرول سایکلاز به توتون

در طبیعت گیاهان تحت استرس های زنده و غیر زنده ی فراوانی قرار می گیرند که منجر به القای استرس اکسیداتیو در آنها می شود.همچنین مقادیر آنتی اکسیدانهای متفاوت به طور قوی در گیاهان افزایش یافته که این امر منجر به ظزفیت افزایش یافته ای برای پاکسازی ROS ها یا گونه های فعال اکسیژن که محصول تولید شده در خلال استرس اکسیداتیو در گیاهان هستند،می شود. ویتامین E شامل یک دسته از آنتی اکسیدانتهای محلول در چربی است که سنتز این گروه از ویتامین ها محدود به ارگانیسم های فتوسنتزی شامل گیاهان، جلبکهاو بعضی سیانوباکترها است. مراحل بیوسنتز توکوفرولها به این صورت است که ابتدا از طریق مسیر شیکیمات در بیوسنتز اسیدهای آمینه آروماتیک p - هیدروکسی فنیل پیروات سنتز شده سپس از طریق آنزیم p - هیدروکسی فنیل پیروات داکسیژناز HPPD هموجنتیسات ساخته می شود. با تاثیر آنزیم توکوفرول سایکلاز TC – γ توکوفرول تولید و در نهایت با دخالت آنزیم - γ توکوفرول متیل ترانسفراز (γ-TMT α توکوفرول ساخته میشود. یکی از راههای مبارزه با استرس های اکسیداتیو در گیاهان انتقال ژن کلیدی مسیر سنتز ویتامین E یعنی توکوفرول سایکلاز به آنها می باشد. در این تحقیق توالی کامل ناحیه کد کننده ژن توکوفرول سایکلاز را که از طریق RT- PCR از روی cDNA آرابیدوپسیس تکثیر یافته بود وارد ناقل pBin که دارای توالی کدکننده پروتئین GFP بود گردید . سپس این سازه ژنی با استفاده از Agrobacterium tumefaciens به توتون انتقال داده شد. برای تراریختی توتون از برگهای گیاهچه های 2 - 3 هفته ای به عنوان ریزنمونه و روش باززایی مستقیم استفاده شد . از آزمون PCR و همچنین کاشت بذور گیاهان تراریخت نسل اول در محیط دارای کانامایسین با توجه به اینکه سازه مورد استفاده دارای ژن مقاومت بهکانامایسین بود، جهت تایید تراریختی استفاده شد. همچنین بذور نسل اول کشت و گیاهان به نسل بعد منتقل گردیدند. تا آنالیزهای یعدی و مطالعات مولکولی و فنوتیپی در شرایط تنش روی آنها انجام گیرد.

Keywords:

تراریختی توتون , توکوفرول سایکلاز , آنتی اکسیدان , ویتامین E , استرس اکسیداتیو