لیلا پورهنگ - Biotechnology Department, Faculty of Agriculture, Azarbaijan Shahid Madani University, Tabriz, Iran
مقصود پژوهنده - Biotechnology Department, Faculty of Agriculture, Azarbaijan Shahid Madani University, Tabriz, Iran
اکبر شیرزاد - Department of plant protection, Faculty of Agriculture, Azarbaijan Shahid Madani University, Tabriz, Iran

استفاده از ویروسهای گیاهی به عنوان حاملهای داروهای ضد سرطان در پزشکی روز به روز درحال افزایش است. تشخیص ویروس­ها با استفاده از آنتی ­بادی­های اختصاصی نیز اهمیت ویژه ­ای برای کنترل بیماری­های گیاهی خصوصا در برنامه تولید بذر سیب­زمینی دارد. یکی از مهمترین ویروس­های سیب زمینی (PVX)  Potato X Potexvirus  با گستره جهانی و جزو اولین ویروسهای گیاهی مورد استفاده به عنوان حامل داروهای ضد سرطانی می­باشد. در این تحقیق به منظور تولید پیکره ­های  PVX، ژن Coat protein (CP) آن بصورت نوترکیب تولید گردید. ابتدا، واکنش  RT-PCRبا استفاده از آغازگر­های اختصاصی حاوی سایت برشی برای تکثیر CP انجام گرفت. الکتروفورز محصول PCR بر روی ژل آگارز، قطعه تکثیر شده به طول bp ۷۱۴ را تایید کرد. ژن CP و پلاسمید  pGBKT۷ توسط آنزیم­های  BamHIو EcoRI برش داده شدند و پس از خالص ­سازی لیگاسیون بین آنها صورت گرفت. پلاسمید نوترکیب pGBKT۷ -CPPVX با الکتروپوراسیون به باکتری E. coli منتقل و در آن تکثیر گردید. پس از گزینش باکتری­های حاوی پلاسمید نوترکیب به کمک PCR و استخراج پلاسمید از آنها، توالی­ یابی درست بودن توالی ژن کلون شده را تایید کرد. در ادامه ژن CP در پلاسمید بیانیpET-۲۱a به روش برش و لیگاسیون همسانه سازی شد. پلاسمید نوترکیب به سویه BL۲۱ باکتری E. coli منتقل و کشت گردید. با اضافه کردن IPTG در محیط کشت باکتری تولید پروتئین CP از روی پلاسمید انجام و پروتئین­های باکتری استخراج شد. الکتروفورز پروتئین، بیان شدن CP را نشان داد. این پروتئین پس از خالص­سازی میتواند به عنوان حامل داروهای ضد سرطان کاربرد داشته باشد.

Cloning, Coat protein, drug carrier, PVX, protein expression, PVX, Coat protein, بیان پروتئین, همسانه سازی, حامل دارو