غربالگری ملکولی سراشیامارسیسنس تولید کننده آنزیم سرایشوپپتیداز از آب های برنج غرب مازندران

سراشیامارسیسنس یک باکتری گرم منفی روده ای است که قابلیت ترشح پروتئین به خارج سلول را دارا است. کشت گونه های سراشیا قادرند آنزیم سرایشوپپتیداز ) STP ( را تا حد زیادی در محیط انتخابی ترشح کنند. سرایشوپپتیداز نوعی آنزیم پروتئولیتیکاست و می تواند به عنوان یک جایگزین مناسب برای عوامل ضد التهابی غیر استروئیدی به کار رود. هدف از این مطالعه جداسازی سویه هایی از سراشیامارسیسنس با قابلیت تولید آنزیم سرایشوپپتیداز از آب های برنج غربمازندران بوده است. در این مطالعه 08 نمونه آب برنج از شالیزارهای مختلف غرب مازندران تحت شرایط استاندارد نمونه گیری شد. پس از تهیه رقتایزوله هایی با فعالیت پروتئازی بر روی محیط Skim milk agar شناسایی و جداسازی گردید. سپس ایزوله ها مورد ارزیابی ساختاری قرار گرفتند و از ایزوله های گرم منفی استخراج DNA به روش سیلیکا ژل صورت گرفت و با استفاده از پرایمراختصاصی ژن 16s rDNA گونه سراشیا مارسیسنس شناسایی گردید. به منظور تعیین توالی محصولات PCR به شرکت ماکروژن کره جنوبی فرستاده شد. ایزوله سراشیا مارسیسنس دارای هاله پروتئازی، مجددا در محیط براث حاوی منبع پروتئین کازئین کشت و پروتئاز ترشح شده، رسوب و تغلیظ گردید. رسوب تغلیظ شده آنزیم برای ارزیابی وزن ملکولی نسبی SDS-PAGE سنجش آنزیمی گردید.نتایج نشان داد که از میان 08 نمونه، 54 نمونه دارای هاله پروتئولتیک و گرم منفی بودند که با استفاده از تکنیک PCR اختصاصیتنها 1 ایزوله سراشیا مارسیسنس شناسایی گردید و نتیجه Sequensing همولوژی 79 % را نشان داد که نشان دهنده سویه جدیدی از باکتری بود. وزن ملکولی پروتئین ترشحی ایزوله N به طور تقریبی KDa 42 تعیین گردید

Keywords:

سراشیا مارسیسنس , غربالگری , 16s rDNA , آنزیم سرایشوپپتیداز , وزن ملکولی