تخلیص پرتوسیس توکسین از سویه واکسینال ۵۰۹ سیاه سرفه و زیست سنجی آن بر اساس آزمایش CHO-Cell
Publish place: Modares Journal of Biotechnology، Vol: 8، Issue: 1
Publish Year: 1396
نوع سند: مقاله ژورنالی
زبان: Persian
View: 57
This Paper With 7 Page And PDF Format Ready To Download
- Certificate
- من نویسنده این مقاله هستم
استخراج به نرم افزارهای پژوهشی:
شناسه ملی سند علمی:
JR_BIOT-8-1_010
تاریخ نمایه سازی: 5 دی 1403
Abstract:
پرتوسیس توکسین مهمترین عامل ویرولانس باکتری Bordetella pertussis است که از نوع اگزوتوکسین های پروتئینی AB۵ می باشد و آنتی ژن محوری درساخت واکسن های غیر سلولی سیاه سرفه است. به دلیل ملاحظات اقتصادی روشهای تخلیص پرتوسیس توکسین بطور کامل منتشر نشده است. هدف از این تحقیق، راه اندازی و اصلاح روش تخلیص پرتوسیس توکسین از مایع رویی کشت باکتری و زیست سنجی آن توسط آزمون CHO-cell بود. سویه واکسینال ۵۰۹ B. pertussis و سلول CHO از موسسه رازی تهیه گردید. کشت باکتری در فرمانتور ۳۰۰ لیتری در دمای ۳۵ درجه سانتیگراد و در محیط B۲ به مدت ۴۴ ساعت صورت پذیرفت. سپس مایع رویی جدا سازی گردیده و به ترتیب با فیلتر ۴۵/۰ میکرومتر تصفیه گردید و سپس با دستگاه اولترافیلتراسیون (cut off ۱۰ kDa) تغلیظ شد. تخلیص توکسین توسط کروماتوگرافی میل ترکیبی با فتوئین سفاروز انجام گردید. پس از اعمال توکسین تخلیص شده بر منولایر سلولی CHO، فرایند خوشه ای شدن سلول ها از ساعت نخست پدیدار گردید و در مشاهدات ساعت دوازدهم به بعد متوقف شد. میزان توکسین تخلیص شده IU/ml ۴۳/۰ ±۵۳/۲ محاسبه گردید. طی تولید واکسن های سلولی، پس از جدا سازی جرم سلولی، فاز مایع دور ریخته می شود، حال آنکه نتایج بررسی حاضر نشان داد این فاز محتوی مقادیر قابل توجه توکسین می باشد. با توجه به آنکه استحصال پرتوسیس توکسین، رکن اصلی در توسعه و ساخت واکسن های نوین غیر سلولی است لذا تحقیقات تکمیلی در خصوص استفاده از سایر سویه ها و بررسی شرایط مختلف کشت باکتری پیشنهاد می شود.
Keywords:
CHO-cell test , Whooping cough , Pertussis toxin. Bordetella pertussis , Affinity chromatography , CHO-cell test , سیاه سرفه , بوردتلا پرتوسیس , پرتوسیس توکسین , کروماتوگرافی میل ترکیبی
Authors
حمید رضا گودرزی
آزمایشگاه مرکزی -موسسه تحقیقات واکسن و سرمسازی رازی - سازمان تحقیقات،ترویج و آموزش کشاورزی- تهران - ایران
علی نظری شیروان
Head of proteomics Lab, Razi Institute
مجتبی نوفلی
بخش تحقیق و تولید واکسنهای باکتریایی انسانی- موسسه تحقیقات واکسن و سرمسازی رازی- سازمان تحقیقات ، ترویج و آموزش کشاورزی- تهران- ایران
علی رضایی مکرم
معاونت تضمین کیفیت- موسسه تحقیقات واکسن و سرمسازی رازی- سازمان تحقیقات، ترویج و آموزش کشاورزی- تهران- ایران
مجتبی سعادتی
استاد گروه زیست شناسی مرکز تحقیقات زیست شناسی- دانشگاه جامع امام حسین (ع)- تهران- ایران