بررسی عملکرد آنزیم CEL I اندونوکلئاز روی ژنوم جهش یافته و نرمال

یک جهش به عنوان تغییر یا تعویض ارثی در ماده ژنتیکی تعریف می شود. با این که جهت ها سبب پیشرفت فرآیند تکامل می شوند اما می توانند بیماریزا نیز باشند. با توجه به اهمیت شناسایی جهت ها در طول سالهای اخیر، دانشمندان به فکر راهکارهایی برای شناسایی آنها پرداختند. از جمله تکنیک هایی که در شناسایی جهت ها نقش دارند استفاده از انواع آنزیم های محدود کننده هستند که به کمک آنها جایگاههای جهش یافته در طول ژنوم شناسایی می شوند. آنزیم اندونوکلئاز CEL I یک گلیکوپروتئین با کاربرد تحقیقاتی از خانواده نوکلئاز های S1 است که مناطق هترودوپلکس را در قطعات DNA در با کارایی بسیار خوب برش می دهد. ویژگی های ارزشمند فعالیت آنزیمی CEL I سبب شده است که روش آنالیز هترودوپلکس مبتنی بر آن از جمله ساده ترین و مؤثرترین روشهای شناسایی مکان جهش های تک نوکلئوتیدی در مولکول های DNA محسوب شود. در این تحقیق هدف بررسی عملکرد آن بر روی ژنوم جهش یافته BRAC1 سرطان سینه در شرایط آزمایشگاهی بود. از پروتئین CEL I که طی روش کروماتوگرافی تمایلی (His. Tag/S.Tag) تخلیص شده بود استفاد شد. از ژنوم های جهش یافته واکنش PCR انجام شد. محصول PCR در ادامه تحت تأثیر پروتئین CEL I اندونوکلئاز تخلیص شد قرار داده شد. در این مرحله از عصاره خالص شده از گیاه کرفس به عنوان کنترل مثبت استفاده شد و آنزیم نوترکیب CEL I ژن موتان را شناسایی کرد و برش داد.

Keywords:

گلیکوپروتئین , الکتروفورز SDS-PAGE , پروتئین نوتریب , کروماتوگرافی تمایلی , هترودوپلکس