بررسی اثر عامل فنوتیپ Mut(Methanol utilization phenotype) بر میزان بیان پروتئین TF نوترکیب خرگوشی در مخمر متیلوتروف Pichia pastoris

؛Tissue factor با ترومبوپلاستین یک گلیکوپروتئین انتگرال غشایی است و بعنوان کوفاکتور در کمپلکس با FBII عمل می کند و منجر به تولید فاکتور VII فعال می گردد. از مهمترین کاربردهای TF استفاده در تسبت (PT(prothrombin time بعنوان فعالی کننده مسیر انعقادی به منظور بررسی نقص های مسیر خارجی انعقاد می باشد. مخمر متیلوتروف Pichia pastoris یکی از کارآمدرین سیستم های بیان پروتئین های نوترکیب می باشد که نسبت به دیگر سیستم های بیانی پروکاریوتی و یوکاریوتی برتری دارد. تاکنون پروتئین های زیادی در مخمر متیلوتروف Pichia pastoris با استفاده از پروموتر الکل اکسیدازI تولید شده است. یکی از فاکتورهایی که به میزان زیادی بر روی فرآیند کشت و بیان پروتئین اثر دارد نوع فنوتیپ methanol utilization phenotype (Mut) سلول های میزبان می باشد. در این تحقیق از وکتور pPICZA که حاوی ژن (rTF(rabbit tissue factor می باشد جهت ترانسفورماسیون سویه GS115 پیکیا پاستوریس استفاده شده است. هدف از این تحقیق تعیین نوع فنوتیپ Mut در سلولهای ترانسفورم شده و بررسی اثر این عامل بر روی بیان پروتئین rTF از طریق مقایسه میزان بیان این پروتئین در دو فنوتیپ (mut(s و(+)Mut می باشد. پس از تخلیص پروتئین بیان شده در هر دو نوع فنوتیپ و اندازه گیری غلظت آن مشاهده شد که تحت شرایط یکسان فنوتیپ (Mut(s میزان بیشتری از این پروتئین را بیان می کند.