همسانه سازی توالی K2S ژن t-PA در ناقل بیانی جهت بیان در مخمر Pichia Pastoris
Publish place: 12th Congress of Iranian Genetics Society
Publish Year: 1391
نوع سند: مقاله کنفرانسی
زبان: Persian
View: 898
This Paper With 5 Page And PDF Format Ready To Download
- Certificate
- من نویسنده این مقاله هستم
استخراج به نرم افزارهای پژوهشی:
شناسه ملی سند علمی:
CIGS12_0427
تاریخ نمایه سازی: 5 بهمن 1392
Abstract:
پروتئین t-PA(Tissue- type Plasminogen activatior) از مهمترین فعال کننده های پلاسمینوژن در جریان خون است که در درمان آنفارکتوس قلبی و سایر مشکلات ترومبوزی مورد استفاده قرار می گیرد. فاکتور نوترکیب( K25(Reteplase، یک فرم موتانت حذفی از مولکول t-PA انسانی است که به فرم غیر گلیکوزیله و inclusion body با تکنیک مهندسی ژنتیک در E.coli بیان می گردد، به طوریکه جهت استفاده از این پروتئین به صورت فاکتور فعال، به فرایندهای استخراج، خالص سازی، refolding و گلیگوزیلاسیون در شرایط in vitro نیاز است. از آنجا که گلیکوزیلاسیون و فولدینگ صحیح این پروتئین در عملکرد آن بسیار مهم است، تولید نوترکیب آن در سیستم های یوکاریوتی از جمله مخمر گزینه مناسب تری محسب می گردد. مخمر P.Pastoris یکی از میزبان های یوکاریوتی مناسب جهت تولید پروتئین های نوترکیب است که به علت دارا بودن پروموترهای قوی قابل القا نظیر الکل اکسیداز 1(AOX1)، قابلیت بیان بالا و سریعی از ژن های نوترکیب را دارد. در بررسی حاضر، توالی ژنی K2S، با استفاده از آغازگرهای اختصاصی رفت و برگشتی تکثیر شد. پس از هضم ناقل بیانی اختصاصی pPIC3.5k و محصول PCR توالی K2S با استفاده از آنزیمهای برشی مناسب، هر دو محصول برش خورده در واکنش اتصال شرکت داده شدند و در مرحله بعد، محصول اتصال طی فرایند ترانسفورماسیون به روش شوک حرارتی به سلول های مستعد E.coli انتقال داده شد. در نهایت صحت محصول همسانه سازی شده طی فرایندهای PCR, Colony PCR و هضم آنزیمی تأئید و جهت آنالیز دقیق تر تعیین توالی گردید.
Keywords:
Authors
مریم پی پل زاده
دانشجوی کارشناسی ارشد بیوتکنولوژی دانشگاه دمشق
سلام لاوند
دانشیار دانشگاه دمش
حمید رجبی معماری
استادیار دانشگاه شهید چمران اهواز
محمد رعایایی اردکانی
دانشیار دانشگاه شهید چمران اهواز
مراجع و منابع این Paper:
لیست زیر مراجع و منابع استفاده شده در این Paper را نمایش می دهد. این مراجع به صورت کاملا ماشینی و بر اساس هوش مصنوعی استخراج شده اند و لذا ممکن است دارای اشکالاتی باشند که به مرور زمان دقت استخراج این محتوا افزایش می یابد. مراجعی که مقالات مربوط به آنها در سیویلیکا نمایه شده و پیدا شده اند، به خود Paper لینک شده اند :