تراریزش عامل رونویسی ANAC025 در ناقل القایی pER8 به اگروباکتریوم و آرابیدوپسیس (Arabidopsis thaliana) و ارزیابی بیانی گیاهان تراریخت

عوامل رونویسی NAC یکی از بزرگترین خانواده عوامل رونویسی در گیاهان هستند که نقشهای مختلف نموی و پاسخ به تنش در گیاهان مختلف ایفا می کنند. ژن ANAC025 به عنوان یکی از اعضای این خانواده دارای بیان اختصاصی در گل است. سیستمهای بیان القایی این اماکن را فراهم می آورند که به طور موقت یک عامل رونویسی را قیاً القا نموده و اثرات این القا را برای شناخت ژنهای پائین دست استفاده نمود. ناقل pER8 یک سیستم القایی بیانی در گیاه است که تحت تیمار استرادیول منجر به القای ژن ه دف می شود. هدف از اجرای این تحقیق انتقال سازه القایی ANAC025-pER8 به آرابیدوبسیس و بررسی القای این ژن تحت تیمار استرادیول در گیاهان تراریخت بود. لذا ابتدا سازه مورد نظر به Agrobacterium tumefaciens به روش شوک الکتریکی انتقال یافت. پس از تأئی کلونهای مثبت با کلونی PCR تراریزش گیاه آرابیدوبسیس تالیانا توسط باکتریهای اگروباکتریوم واحد سازه مورد نظر به روش نفوذ در مرحله غنچه دهی انجام شود. سپس بذور جمع آوری شده پس از ضد عفونی بر ری محیط کشت MS حاوی ساکارز و هیگرومایسین کشت شدند. گیاهچه های مقاوم به گلدان منتقل شدند و بعد از سه هفته از هر گیاه دو نمونه برگی تهیه و تحت تیمار استرادیول و اتانول (کنترل) قرار گرفت. سپس RNA از برگهای 5 ساعت تیمار شده استخراج شد و پس از حذف DNA ژنومی، cDNA تک رشته ای ساخته شد. آزمونهای لازم در خصوص کیفیت سنجی RNA و cDNA انجام شد. سپس qRTPCR با استفاده از آغازگرهای اختصاصی برای این ژن انجام شد. نتایج حکی از القای بالا و فراوانی 4/3، 30 و 7/5 برابری رونوشت مورد نظر در شرایط القایی در سه لاین مورد نظر بود، که بر موفقیت کامل سازه مورد نظر صحه گذاشت.

Keywords:

عامل رونویسی , ANAC025 , بیان القایی , آنالیز بیان ژن