ایجاد دو واریانت از فتوپروتئین نمیوپسین از طریق جهش زایی هدفدار در موقعیت 101 و بررسی ویژگی های بیوشیمیایی آنها

فتوپروتئین ها اعضایی از خانواده پروتئین های تنظیم شونده توسط کلسیم هستند و مسئول بیولومینسانس موجودات دریایی می باشند. تاکنون بیشترین مطالعات عملکردی و ساختاری روی فتوپروتئین های کلنترات بویژه اکورین و ابلین صورت گرفته و تحقیقات اندکی روی فتوپروتئین های شانه داران از ج مله نمیوپسین انجام شده است. هدف: با توجه به کاربردهای متنوع فتوپروتئین ها دسترسی به واریانت های نمیوپسین با خصوصیات مختلف می تواند کاربرد این پروتئین ها را توسعه دهد. در این تحقیق سعی براین است که با استفاده از تغییر یکی از آمینواسیدهای جایگاه اتصال کولنترازین (باقیمانده موقعیت 101) بتوان اطلاعاتی در مورد نقش احتمالی این باقیمانده در بیولومینسانس نمیوپسین بدست آورد. روش: بدنبال انجام مطالعات تئوری و ساختاری و تطابق توالی نمیوپسین با اکورین و ابلین، باقیمانده های درگیر در حفره اتصال کولنترازین تعیین و باقیمانده کاندید جهت موتاسیون انتخاب شد. جهش زایی هدفدار با استفاده از روش Quick change انجام گرفت. تولید پروتئین های وحی و جهش یافته توسط میزبان E.coli (DE3)BL21 صورت گرفت. نهایتاً ویژگی های بیوشیمیایی موتانت های خالص تعیین و با فتوپروتئین وحشی مقایسه شد. نتیجه: نتایج حاصله نشان داد که جهش در موقعیت 101 منجر به کاهش فعالیت بیولومینسانسی در هر دو موتانت W101F و W101Y شده است. بررسی ویژگی های بیوشیمیایی مشخص کرد که در حالیکه pH اپتیمم موتانت ها تفاوت چشمگیری با پروتئین وحشی نشان نمی دهد، میزان حساسیت به کلسیم در هر دو جهش یافته افزایش یافته است.

Keywords:

نمیوپسین , بیولومینسانس , فتوپروتئین , موتانت