بررسی بیان ژن پروانسولین انسانی در باکتری E.coli با استفاده از حامل کلروپلاستی pKCZ

تولید پروتئین نوترکیب در کلروپلاست در مقایسه با انتقال هسته ای ژن یک سری مزایا دارد. حامل کلروپلاستی pKCZ دربردارنده ژن پروانسولین انسانی به روش شوک حرارتی به باکتری E.coli سویه DH5α انتقال داده شد و باکتری های تراریخته بر روی محیط حاوی 0/1 میلی گرم بر میلی لیتر آنتی بیوتیک آمپی سیلین انتخاب شدند. حضور ژن پروانسولین در کلونی های باکتری تراریخته شده با استفاده از انالیز PCR تأئید شد. از آنجایی که کلروپلاست دارای منشا باکتریایی می باشد و ماشین ساخت پروتئین در کلروپلاست مشابه نوع باکتریایی می باشد، بیان ژن پروانسولین ابتدا در باکتری E.coli با استفاده از سازه pKCZ-Ins مورد بررسی قرار گرفت، باکتری حاوی سازه را در محیط حاوی 0/1 میلی گرم بر میلی لیتر آمپی سیلین و غلظت های مختلف آنتی بیوتیک اسپکتینومایسین کشت و تولید پروتئین پروانسولین را با آزمون بلات نقطه ای و SDS-PAGE مورد آزمون قرار گرفت.

Keywords:

کلروپلاست , پروتئین نوترکیب , پروانسولین