بهینه سازی روش های استخراج DNA از گوشت و فرآورده های گوشتی

هدف: امروزه روش های مولکولی مخصوصاً واکنش زنجیره ای پلیمراز (PCR) در بررسی محصولات گوشتی از اهمیت روز افزونی برخوردار است، استخراج DNA اولین گام در این بررسی ها است. نقطه شروع بسیاری از روشهای بیولوژی مولکولی، ضرورت جداسازی DNA با کیفیت عالی است. معمولاً کیفیت DNA با عواملی از قبیل عدم آلودگی ناشی از RNA، پروتئین، لیپید و سایر ساختارهائی که برای آنزیمهای برشی و پلی مرازها مزاحمت ایجاد می کنند سنجیده می شود. استخراج DNA مخصوصاً از فرآورده های گوشتی حرارت دیده بخاطر اثرات تخریبی حرارت بر روی DNA، خیلی مشکل است. مواد و روش ها: در این مطالعه، برای استخراج DNA 10 برند سوسیس از سه پروتکل مختلف کیت استخراج GF-1، روش TNES و CTAB بر طبق روش Sambrook و همکاران 1989 با اعمال تغییراتی استفاده شد. بر روی DNA های استخراج شده ارزیابی کمی (نانودراپ) و کیفی (ژل آگارز) انجام شد. واکنش PCR بر روی تمام نمونه ها با پرایمر یونیورسال ژن 12SrRNA انجام شد. نتایج و بحث: نتایج آزمایش کیفی و کمی نشان داد که استفاده از کیت استخراج GF-1 برای استخراج DNA از سوسیس مناسب نبود. نتایج آزمون کیفی در مورد استخراج با دو بافر استخراج TNES و CTAB نشان داد که روش CTAB مناسب تر از روش TNES بود ولی نتایج آزمایش کمی (نانودراپ) بر روی DNA استخراج شده در دو روش بیانگر این بود که میزان جذب محلول DNA در محدوده 1/7-2 قرار داشت. که نشان دهنده کمیت بالای DNA استخراجی است. تمامی DNA های استخراجی به وسیله واکنش PCR تکثیر شد. نتیجه گیری کلی: به نظر می آید روش استخراج DNA با بافر CTAB روش مناسب تری نسبت به دو روش دیگر باشد. این روش می تواند برای استخراج DNA از محصولات گوشتی حرارت دیده به صورت روتین در آزمایشات استفاده شود.

Keywords:

بهینه سازی استخراج DNA , فرآورده های گوشتی , TNES , CTAB